ICS 67.040 C53 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.149--2003 代替GB/T 17335-1998 食品中栀子黄的测定 Determination of crocin in foods 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会 发布 255
GB/T 5009. 149-2003 前言 本标准代替GB/T17335一1998（食品中栀子黄的测定》。
本标准按照GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法）对原标准的结构进行 了修改。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并妇口， 本标准负资起草单位：中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所：参加起草单位：卫生部食品 卫生监督检验所。
本标准主要起草人，李严巍、王梅、杨祖英。
原标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。
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GB/T5009.149-2003 引言 子黄作为食品着色剂已经列人GB2760-1996食品添加剂使用卫生标准，最大使用量0.3g/kg。
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GB/T 5009.149-2003 食品中栀子黄的测定 1范围 本标准适用于饮料、酒、糕点中子黄的测定， 第一法检出限为3.2μg/mL：标准曲线线性范围为0ng/mL~200ng/ml。
第一法高效液相色谱法 2原理 试样中柜子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，枪子式是想子黄 的主要成分，为对照品。
3试剂 试剂均为分析纯，水为燕馏水， 3.1甲醇， 3.2石油醚：60℃~90℃ 3.3乙酸乙酯. 3.4三氯甲烷。
3.5要黄色素. 3.6于式。
3.7栀子贰标准溶液：称取2.75mg子式标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀.即得 27.5μg/mL根子贰. 3.8子式标准使用液：分别吸取柜子式标准溶液0.2.0.4.0.6.0.8.0mL于10mL容量瓶中.加甲 醇定容至10mL，即得0，5.5.11.0，16.5.22.0pg/mL的栀子式标准系列溶液， 4仪器 4.1小型粉碎机。
4.2恒温水浴， 4.3高效液相色谱系统：Water'sM510泵，U6K进样器，岛津RF-535. 荧光检测器，Blue chip/PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。
5分析步骤 5.1试样处理 5.1.1饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，播匀后，通过微孔滤膜0.4μm过滤，滤液备 作HPLC分析用， 5.1.2酒：试样通过微孔德膜过露，滤液备作HPLC分析用. 5.1.3点：称取10g试样效入100mL.的圆底烧账中，用50mL石油醒加热回流30min.置室温。
砂芯隔斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并人滤液中，减压浓缩石油醋提取液，残澄放入通风厨至无 石油醚味，用甲醇提取3次~5次，每次30mL.直至提取液无柜子黄额色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过 692
GB/T 5009. 149-2003 微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。
5.2测定 5.2.1HPLC参考条件 色谱柱：粒度5μmODSC150mmX4.6 mm; 流动相：甲醇+水（35+65）： 流速：0,8mL/min; 波长：240nm， 5.2.2标准曲线 在本实验条件下，分别注人子式标准使用液0.2，4，6，8pL，进行HPLC分析，然后以峰赛对舰子 式浓度作标准曲线。
5.2.3试样测定 在实验条件下，注人5pL5.1试样处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得试样中栀子 式含量， 6结果计算 按下式计算： mX1000 式中： X-试样中榄子黄色素的含量，单位为克每千克（g/kg）： A-进样液中视子式的含量，单位为微克每毫升（pg/mL）； V-试样制备液体积，单位为毫升（mL）： 期-试样质量，单位为克（g）。
7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过5%。
第二法薄层色谱法 8原理 UV254nm灯下呈黑色班点，与标准比较进行定性，及概略定量， 9试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸墙水， 9.1甲醇。
9.2乙醇. 9.3乙酸乙酯， 9.4丙酮。
9.5甲酸、 9.6三氯甲烷， 9.7硅胶GF254：薄层色谱用。
9.8展开剂：乙酸乙酯+丙酮+甲醇+水（5+5+1+1）。
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