GB/T 41212-2021 纳米技术 荧光素二乙酸酯法检测纳米颗粒诱导巨噬细胞产生的活性氧

ICS07.120
CCS C04
中华人民共和国国家标准
GB/T41212—2021/ISO/TS19006:2016
纳米技术
荧光素二乙酸酯法检测
纳米颗粒诱导巨噬细胞产生的活性氧

Nanotechnologies-5-(and 6)-Chloromethyl-2,7'Dichloro-dihydrofluorescein diacetate (CM-H2 DCF-DA)assay for evaluating nanoparticle-induced intracellular reactive oxygen species (ROS)production in RAW 264.7 macrophage cell line(ISO/TS19006:2016,IDT)
2021-12-31发布 2022-07-01实施
国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布

1范围
本文件描述了如何用5-(6)-氯甲基-2'，7'二氯二氢-荧光素二乙酸酯(CM-H2DCF-DA)检测和评价
RAW264.7巨噬细胞暴露于纳米物体、纳米颗粒及其聚集体和团聚体后产生活性氧(ROS)的方法。
本文件适用于用24孔板的检测。如果用其他孔板，需要调整样品用量并检验操作步骤的有效性以保证检测结果可信。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
ISO10993-5医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验(Biological evaluation of medical devices-Part 5:Tests for in vitro cytotoxicity)
ISO/TS80004-2纳米技术术语第2部分：纳米物体(Nanotechnologies-一Vocabulary-一Part2:Nano-objects)
3术语和定义
ISO/TS80004-2、ISO10993-5界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
下列网址为ISO和IEC负责的应用于标准中的数据库网址。
ISO在线浏览平台：http://www.iso.org/obp
IEC在线浏览平台：http://www.electropedia.org

3.1
团聚体agglomerate
弱束缚颗粒的堆积体、聚集体或二者的混合体，其外表面积与其单个颗粒的表面积的总和相近。
注1：支撑团聚体的作用力都是弱力，如范德华力或简单的物理缠结。
注2：团聚体也被称为次级颗粒，而源颗粒则被称为初级颗粒。
[来源：ISO/TS80004-2:2015,3.4]
3.2
聚集体aggregate
强束缚或融合在一起的颗粒构成的新颗粒，其外表面积可能显著小于其单个颗粒表面积的总和。
注1：支撑聚集体的力都是强作用力，如共价键或源于烧结或复杂的物理缠结。
注2：聚集体也被称为次级颗粒，而源颗粒则被称为初级颗粒。
[来源：ISO/TS80004-2:2015,3.5]
3.3
培养器皿culture vessels
包括玻璃培养皿、塑料培养瓶或塑料多孔培养板和微量滴定板等适用于细胞培养的器皿。

注：在这些试验方法中，这些器皿只要符合组织培养级别的要求，并适用于哺乳动物细胞培养，可以互换使用。
[来源：GB/T16886.5一2017,3.1，有修改]
3.4
分散体系dispersion
微观多相系统，其中非连续态（固体，液体或气体：不连续相）分散在组成或状态不同的连续相中。
注：如果是固体颗粒分散在液体中，则将该分散体系称为悬浮液。如果分散体系由两个或多个液相组成，称为乳
液。悬浮乳液由分散在连续液相中的固相和液相组成。
[来源：ISO/TR 13097:2013,2.5]
3.5
内毒素endotoxin
革兰氏阴性菌细胞膜外膜的一部分。
注：主要活性成分为脂多糖(LPS)。
[来源：ISO 29701:2010,2.3]
3.6
纳米物体nano-object
一维、二维或三维外部尺寸处于纳米尺度(3.8)的物体。
注：三个外部维度互相垂直，
[来源：ISO/TS80004-2:2015,2.2]
3.7
纳米颗粒nanoparticle
三个维度的外部尺寸都在纳米尺度的纳米物体(3.6)。
注：如果纳米物体最长轴和最短轴的长度差别显著（大于3）时，可用纳米棒和纳米片来表示纳米颗粒。
[来源：ISO/TS80004-2:2015,4.4]

3.8
纳米尺度nanoscale
处于1nm至100nm之间的尺寸范围。
注：本尺寸范围通常、但非专有地表现出不能由较大尺寸外推得到的特性。
[来源：ISO/TS80004-2:2015,2.1,有修改]
3.9
阴性对照材料negative control material
不产生细胞毒性反应的材料或化学品。
注1：阴性对照的目的是显示细胞的背景反应。
注2：材料或化学品根据GB/T16886.5一2017进行测试。
[来源：GB/T16886.5一2017,3.4，有修改]
3.10
颗粒particle
具有确定物理边界的一小部分物质。
注1：一个边界也可以看成一个界面。
注2：一个颗粒可以作为一个整体移动。
注3：该通用颗粒定义适用于纳米物体(3.6)。
[来源：ISO/TS80004-2:2015,3.1]

4符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本文件。
CM-H2DCF-DA:5-(6)-氯甲基-2'，7'二氯二氢-荧光素二乙酸酯[5-(and-6)-chloromethyl-2',7'Di-
chloro-dihydro-fluorescein diacetate,acetyl ester
DCF:2',7'-二氯荧光素(2'，7'-dichlorofluorescein)
DMEM:Dulbecco改良的Eagle培养基(Dulbecco’s modified Eagle medium)
DMSO:二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide)
FBS:胎牛血清(fetal bovine serum)
MESF:可溶性荧光基团(molecular equivalents of soluble fluorophore)
MTS:3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑[3-(4,5-dimeth-
ylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium
PBS:磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline)
ROS:活性氧(reactive oxygen species)
Sin-1:3-吗啉代二亚胺(3-morpholinosydnonimine)

投稿会员：芳华