ICS65.150 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5188—2020 迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范 Quarantine protocol for edwardsiellasis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5188—2020 迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范 1范围 本文件规定了迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光PCR的检测 技术要求. 本文件适用于水生动物迟缓爱德华氏菌病检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. E.tarda:迟缓爱德华氏菌. 4迟缓爱德华氏菌病 迟缓爱德华菌病，是由迟缓爱德华菌引起的水生动物疾病的统称.鱼类感染后主要出现肠道败血 症和肝肾坏死病.迟缓爱德华氏菌病流行病学、临床症状、病理变化等资料参见附录A. 5病原分离与鉴定 5.1仪器设备 显微镜：10×~100×. 5.2培养基 5.2.1血琼脂：见B.1. 5.2.2营养琼脂：见B.2. 5.2.3硫酸亚铁琼脂：见B.3. 5.2.4半固体琼脂：见B.4. 5.2.5丙二酸钠培养基：见B.5. 5.2.6蛋白脉水：见B.6. 5.2.7葡萄糖蛋白胨培养基：见B.7. 5.2.8赖氨酸脱羧酶培养基：见B.8. 5.2.90NPG培养基：见B.9. 5.2.10糖发酵管：见B.10. SN/T5188-2020 5.2.11可使用商业化的培养基. 5.3病料的采集和处理 无菌采取适量患病动物肝、肾及病变组织，置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗，匀浆待用.如 不能立即进行检验，需将采集或处理的样品置4℃~8℃条件下保存，且不超过24h. 5.4分离培养 取样品匀浆，划线接种血琼脂平板，28℃±1℃培养24h~48h.从中挑取灰白色、圆形、湿润、 呈半透明状的单菌落在普通营养琼脂平板上纯化培养. 5.5染色镜检 将可疑菌进行革兰氏染色，于显微镜下观察.迟缓爱德华氏菌为革兰氏阴性短杆菌，无英膜，无 芽胞，大小约为(0.5Hm~1m)×(14m~3Hm). 5.6生化试验 5.6.1氧化酶试验 取白色洁净滤纸蘸取菌落，加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加 深；再加1%α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性者于两分钟内不变色.或以毛 细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与前述相同. 5.6.2生化鉴定试验 氧化酶试验为阴性的可疑菌按附录C...
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