ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5193—2020 兔球虫病检疫技术规范 Quarantine protocol for rabbit coccidiosis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5193-2020 兔球虫病检疫技术规范 1范围 本文件规定了兔球虫病检疫时的样品采集、病原形态学观察以及PCR检测等技术规范. 本文件适用于活兔、带肝脏兔胴体球虫感染情况的检测，也适用于兔养殖场兔球虫病的流行病 学调查和监测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规模和试验方法 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonueleie Acid) PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) SDS:十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate) 4疫病概述 参见附录A. 5材料 5.1除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯.试验用水要求达到GB/T6682中一级水的要求. 5.2基因组DNA抽提试剂盒、PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶、DNA Marker、蛋白酶K、氯化钠、 重铬酸钾、三氯甲烷、SDS、异丙醇、琼脂糖、无水乙醇等，均为商品化试剂. 5.3饱和氯化钠溶液、2.5%重铬酸钾溶液、0.5%SDS消化液、裂解液、20mg/L蛋白酶K溶液、 酚/三氯甲烷/异戊醇溶液、70%乙醇、3m0l乙酸钠溶液、电泳缓冲液、生理盐水的配制方 法见附录B. 5.4艾美耳球虫Eimeia spp.通用引物：ITS1-F:5-GGGAAGTTGCGTAAATAGA-3;ITS1-R: 5'-CTGCGTCCTTCATCGAT-3'.引物合成后均采用灭菌ddH20稀释为10mol/L(具体序列见 附录C). 5.5PCR检测阴阳性对照：阳性对照为11种兔球虫DNA基因组中的一种，阴性对照为健康兔肝 (肠)组织样品. 1 SN/T5193-2020 6仪器设备与耗材 天平、镊子、载玻片、漂浮管、自封袋、60目小铜筛、显微镜、制冰机、冰箱(4℃、-20℃、- 8O℃)、高压灭菌器、冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪或紫外透射仪、微量可调移液器及 吸头、1.5mL离心管等. 7检测方法 7.1样品采集 7.1.1肝脏、肠病灶样品采集 切取肝脏结节病灶、肠粘膜结节病灶组织，每份2g左右，装入干净的自封袋中，标明编号， 记录兔的年龄、品种、饲养卫生条...
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