ICS65.020.01 CCS B16 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5204—2020 植物病原细菌筛查MALDI-TOF MS法 Plant pathogenic bacteria screen MALDI-TOF MS method 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5204—2020 植物病原细菌筛查MALDI-TOF MS法 1范围 本文件规定了植物病原细菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测方法. 本文件适用于植物病原细菌纯培养物快速筛查检测. 2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4方法原理 细菌细胞体内大约含有200个~6000个蛋白质分子，占菌体干重50%左右，具有种属特征， 可通过MALDI--TOF MS测定小分子多肽分子量及结构等信息，实现细菌的种属鉴定. 5仪器及用具 5.1仪器 高压灭菌锅、光照培养箱、天平（感量1/100；1/10000）、水浴锅、纯水仪、旋涡振荡器、台式 离心机、冰箱、超净工作台、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪、超声波震荡仪. 5.2用具 培养皿、量筒、吸管、酒精灯、滤纸、微量移液器(0.5L、2L、10uL、20L、100L、200L、 1000L)、PCR反应管(0.2mL、0.5mL、1mL)、Tip头(0.1uL~10uL、5L~200L、100uL~1000uL)、 质谱分析样品靶. 6试剂、溶液和培养基 试剂、溶液和培养基配方见附录A. 7筛查方法 7.1菌株培养 供试菌株划线接种到NBY等相关培养基活化培养，28℃±2℃黑暗培养48H后备用. SN/T5204-2020 7.2菌体处理 具体步骤见附录B. 7.3质谱分析 7.3.1仪器条件 7.3.1.1仪器：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪. 7.3.1.2激光能量：根据样品，可在0%~100%范围调节. 7.3.1.3质谱扫描范围：1000Da~20000Daa 7.3.1.4检测方式：线性正离子检测方式. 7.3.1.5微生物指纹图谱库：仪器自带数据库或自建同等类型数据库. 7.3.2质控标准品校准 每次检测样品前推荐使用标准品Peptide Calibration Standard和Protein Calibration Standard I的混合 液或者同等类型标准品的特征峰校准质谱仪. 7.3.3点样 7.3.3.1在质谱靶上点1L上清液，每个样品点4个重复. 7.3.3.2取1L标准校正溶液作为对照. 7.3.3.3室温自然晾干后，尽快点上1L基质，晾干. 7.3.4鉴定 将样品靶标板放人仪器内，设定激光能量、质谱扫描范围等参数，进行质谱数据采集.然后将经 过处理...
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