ICS65.020.01 CCS B 16 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5205—2020 柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Pepino mosaic virus 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5205—2020 柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本文件规定了柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法. 本文件适用于可能带有柏平缕瓜花叶病毒的植物种子、苗木及产品的检疫鉴定. 2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4原理 学名：Pepino mosaic virus 缩写：PepMV 分类地位：甲型线状病毒科(Alphaflexiviridae) 马铃薯X病毒属(Potexvirus)的成员抗原特性 和基因组特征是检疫鉴定的主要依据. 详细资料参见附录A. 5主要仪器设备与试剂 5.1主要仪器设备和用具 微量研磨仪、酶标仪、洗板机、微量天平（感量：0.O01g)、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝 胶成像仪、高速冷冻台式离心机、制冰机、旋涡震荡器、水浴槽、PH计、可调移液器(1O00μL、 200μL、20μL、2μL)、96孔酶标板、研钵等. 5.2主要试剂 主要试剂和缓冲液见附录B、C、D. 6检测样品的制备 6.1种子样品制备 挑取畸形、不成熟种子在防虫网室内播于灭菌土中，待长出3片~4片真叶后将表现症状的植株 编号，未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号，采集的真叶分成2份，根据需要分别用于后 续的试验.种子也可以直接检测. SN/T5205-2020 6.2苗木和植物产品 有症状（如叶片畸形、花叶、斑驳等）的苗木和植物产品编号单独检测.没有症状的分组并编号 检测，分组方法和检测方法同6.1. 7检测与鉴定 7.1双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA) 设阴性对照和阳性对照（健康的植物组织作阴性对照，感染了PepMV的植物组织作阳性对照）， 样品提取缓冲液作空白对照，其中阴性对照种类和材料（如种子或叶片）应尽量与检测样品一致.不 同的检测试剂或试剂盒根据试剂或试剂盒的说明操作.具体操作见附录B. 7.2一步法RT-PCR检测 分别提取样品和对照的总RNA RT-PCR一步法进行PCR扩增.健康的植物组织作阴性对照， 感染PepMV的植物组织作阳性对照，用ddH2O作空白对照.具体操作见附录C. 7.3一步法实时荧光RT-PCR检测 分别提取样品和对照的总RNA 进行一步法实时荧光RT-PCR检测.健康的植物组织作阴性对照， 感染PepMV的植物组织作阳性对照，ddH2O作空白对照.具体操作见附录D. 8结果判定 酶联检测为阳性后，RT-PCR或实时荧光R...
SN/T 5205-2020 柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法.pdf
