ICS65.020 CCS B16 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5206—2020 洋葱黄矮病毒的检疫鉴定方法 Detection and identification of onion yellow dwarf virus 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5206—2020 洋葱黄矮病毒的检疫鉴定方法 1范围 本文件规定了洋葱黄矮病毒检测的程序和方法. 本文件适用于进出境植物及其产品中洋葱黄矮病毒的检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单） 适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 SN/T2964植物病毒检测规范 SN/T3457植物病毒分子生物学检测规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4原理 洋葱黄矮病毒的血清学特性和基因组特征是制定本检疫鉴定方法的主要依据. 5仪器设备、用具及试剂 5.1仪器设备 高速冷冻离心机、电子天平(1/1000g)、酶联仪、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、-20℃低温冰 箱和-80℃超低温冰箱、凝胶成像分析系统、H计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌 锅、超净工作台等. 5.2用具 各种量程的可调移液器(1000L、200L、100L、20L、10L、2L)、PCR反应管、离心管 (1.5mL)、研钵等. 5.3试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定.DAS-ELISA试剂 见附录A、RT-PCR试剂见附录B. 1 SN/T5206—2020 6抽样和样品制备 6.1抽样 抽样方法按照SN/T2122相关中规定执行. 有病毒危害症状的植物材料单独抽样，OYDV的危害症状描述参见附录C;无危害症状的植物材 料抽样方法按照SN/T2122中相关规定执行. 6.2样品制备 分别按照有症和无症进行样品制备，具体方法按照SNT2964和SN/T3457中规定执行. 7检测与鉴定 7.1 DAS-ELISA DAS-ELISA具体方法见附录A. 7.2 RT-PCR RT-PCR具体方法见附录B. 8结果判定与记录 8.1结果判定 样品检测时，检测流程及结果判定按下述原则进行： 首先采用DAS-ELISA进行初步筛检. 若检测结果为阳性，采用RT-PCR方法进行验证.若验证结果为阴性，则判定样品不携带 OYDV;若验证结果为阳性，则判定样品携带OYDV. 若检测结果为阴性，采用RT-PCR方法进行验证.若验证结果为阴性，则判定样品不携带 OYDV;若RT-PCR验证结果为阳性...
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