ICS07.100.30 CCS X 04 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5364.4—2021 出口食品中致病菌检测方法 微滴式数字PCR法 第4部分：创伤弧菌 Droplet digital PCR method for detection of pathogens in export food- Part 4:Vibrio vulnificus 2021-11-22发布 2022-06-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5364.4-2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草. SN/T5364一2021《出口食品中致病菌检测方法微滴式数字PCR法》共分为8个部分： 第1部分：副溶血性弧菌； 第2部分：霍乱弧菌； 第3部分：溶藻弧菌； 第4部分：创伤弧菌； 第5部分：金黄色葡萄球菌； 第6部分：单核细胞增生李斯特氏菌； 第7部分：产志贺毒素大肠埃希氏菌； 第8部分：克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）. 本文件为SN/T5364一2021的第4部分. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中国海关科学技术研究中心、中华人民共和国石家庄海关. 本文件主要起草人：马丹、张琳、李丹、魏海燕、魏咏新、张西萌、徐蕾蕊、杨丽莉、曾静. I SN/T5364.4-2021 出口食品中致病菌检测方法 微滴式数字PCR法 第4部分：创伤弧菌 1范围 本文件规定了食品中创伤弧菌的微滴式数字PCR检测方法. 本文件适用于食品中创伤弧菌的快速定性检测. 本文件的检出限为1CFU/25g~5CFU/25g(或1CFU/25mL~5CFU/25mL). 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测 NMKL No.156食品中致病性弧菌的检测和计数(Pathogenic Vibrio species detection and enu一 meration in foods) 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4缩略语 下列缩略语适用于本文件. DNA(deoxyribonuleic acid):脱氧核糖核酸. ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction):微滴式数字PCR. met(metalloprotease):金属蛋白酶基因. PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应. 5方法原理 针对创伤弧菌金属蛋白酶基因(met)保守序列设计引物、探针，将一定浓度的引物、探针与模板DNA 及数字PCR反应预混液混合，配成PCR反应体系.将该数字PCR体系分布到10000~20000个微滴中， 使大部分微滴中模板DNA分子的数量为1或0，然后进行PCR扩增.mt基因探针5’端标记FAM荧光 基团，利用数字PCR系统的检测通道，可对每个微滴的荧光信号进行采集分析.含有模板DNA的微滴出 现荧光信号的增强，形成阳性微滴簇.最终根据阳性微滴的有无判定样品中是否含有创伤弧菌. 1 ...
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