CCS B 16 ICS 65.020.20 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5528-2022 大麦条纹花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Barley stripe mosaic virus 2022-07-07发布 2023-02-01实施 中华人民共和国海关总署 发布
SN/T5528-2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国广州海关、广东杰信检验认证有限公司、中华人民共和国上海 海关。
本文件主要起草人：冯黎霞、魏霜、李献锋、于、武目涛、赵立荣、黄璐、于翠、杨翠云。
SN/T 5528-2022 大麦条纹花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本文件规定了大麦条纹花叶病毒DASELISA、普通RTPCR和实时荧光RTPCR检疫鉴定方法。
本文件适用于籽粒、花粉、种苗及其他植物产品中大麦条纹花叶病毒的检疫和鉴定。
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。
4大麦条纹花叶病毒基本信息 学名：Barley stripe mosaic virus。
异名:Barley false stripe virus, Barley mild stripe virus, Barley mild stripe mosaic virus, Barley mosaic virus,Barley stripe mosaic hordeivirus, Oat stripe mosaic virus。
缩写：BSMV。
分类地位：RNA病毒域（Riboviria），正RNA病毒界（Orthornavirae），黄病毒门（Kitrinovirico ta），甲型超群病毒纲（Alsuviricetes），马泰利病毒目（Martellivirales），植物杆状病毒科（Virgaviri- dae），大麦病毒属（Hordeivirus）。
大麦条纹花叶病毒的其他信息参见附录A。
5方法原理 大麦条纹花叶病毒的血清学和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据。
根据BSMV与抗体之间的 特异性反应，对植物样品进行双抗体夹心免疫酶联吸附测定（DASELISA)；根据BSMV的基因组特征 建立RTPCR和实时荧光RTPCR检测方法。
6仪器用具与试剂 6.1仪器 微量天平、高速冷冻离心机、小型瞬时离心机、普通冰箱（4℃）、超低温冰箱、高压灭菌锅、pH计、超 1
SN/T 5528-2022 净工作台、酶标仪、洗板机、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析仪。
6.2用具 移液器（最大量度分别为1000μL、200μL、100μL、10μL、2.5μL）、酶联板、离心管（1.5mL、 0.2mL）、研磨用具（研钵研栋或小型料理机）。
6.3主要试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定。
DASELISA试剂详见附录B。
RTPCR检测试剂详见附录C。
实时荧光RTPCR检测试剂详见附录D。
7制备检测样品 7.1籽粒 7.1.1直接制备 籽粒抽样按照SN/T2122的规定执行。
根据酶联免疫测定和分子生物学检测不同的样品制备需求，随机取样或者挑选畸形、生长不成熟的 籽粒直接制备检测样品。
7.1.2育苗取样 随机取样或挑选外观不正常的籽粒播撒在铺有无菌滤纸的培养盘中，培养过程中滤纸需一直保持 湿润状态，或将挑选的籽粒浸泡萌芽后播种在无菌土中，培养观察。
待长出完全舒展的叶片后，将表现 有BSMV疑似症状的植株单独编号，未表现BSMV疑似症状的植株分组（10～20株为1组）并编号，根 据需要分别用于酶联免疫测定和分子生物学检测。
7.2种苗 有症状（如叶片花叶、条斑、坏死等）的植株，每个植株进行单独编号检测。
无症状植株分组并编号 后进行检测，分组和检测方法参照7.1.2。
7.3其他植物产品 无症状或无法观察症状的其他植物产品，参照SN/T2122中规定的抽样方法进行抽样，分组编号 方法和检测方法参照7.1.2。
8检测鉴定 8.1双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA） 设置1个重复。
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