UDC633.1:543.062 GB 中华人民共和国国家标准 GB4801-84 调整为：NY个9-1984 谷类籽粒赖氨酸测定法 染料结合赖氨酸(DBL)法 Method for determination of lysine in cereal grains -Dye -binding lysine method 1984-12-20发布 1985-10-01实施 国家标准局批准 GB4801-84 201型蛋白质分析仪上测定透光率（为提高灵敏度，用连续档测定.即以40ml3.89mM染料溶液加 25ml缓冲溶液，调透光率为0；40ml3.89mM染料溶液加125ml缓冲溶液，调透光率为87).然后以 透光率(%)为纵坐标，染料浓度(mM)为横坐标，在半对数座标纸上绘制标准曲线.或将透光率 换算为吸光度，计算回归方程.若用GXDL-202型蛋白质赖氨酸分析仪，则可直接读出吸光度，然 后以吸光度E为纵坐标，染料浓度(M)为横坐标，在普通坐标纸上绘制标准曲线，或计算回归方 程. 5测定步骤 5.1试样的选取与制备 选取有代表性谷类籽粒，挑栋干净，按四分法缩减取样，取样量不得少于20g.将籽粒充分风干 或放在55~60℃烘箱中干燥六小时以上.带壳水稻、高粱，先脱壳，再用粉碎机粉碎，使90%以上通 过0.25mm筛孔，充分混匀，装人磨口瓶中备用. 5.2称样 参照表1称样量，称取酰化和不酰化样品各两份，准确到0.4mg 分别放入30~35ml具塞玻璃管 内，标明为A管（酰化样品）和B管（不酰化样品）.与此同时，另称样品，按GB3523一83《谷类、 油料作物种子水分测定法》测定水分含量. 谷类籽粒的称样量 g 样品名称 酰化样品 不酰化样品 水稻 0.7或0.8 0.5或0.6 普通玉米 0.8 0.6 高赖氨酸玉米 0.7或0.5 0.5或0.4 高梁 1.0 0.7 麦类 0.5 0.4 注：称样量系根据试验选定的，如果剩余染料溶液的浓度超出1.2~1.8mM时，称样量应作适当调整. 5.3丙酰化反应 各管分别加入2.00m116%乙酸钠溶液（灿稻加8%乙酸钠溶液），然后加0.20ml丙酸酐于A管中， 加0.20ml缓冲溶液于B管中.盖紧塞子，放置振荡机上振荡十分钟. 5.4染料结合反应 向A、B管中分别加入20.00m3.89mM染料溶液，盖紧塞子，置振荡机上振荡一小时（水稻两小时）. 5.5离心 将上述反应液于3000~4000r/min下离心十分钟. 5.6测定 在GXD-201型蛋白质分析仪或GXDL-202型蛋白质赖氨酸分析仪上测定上清液（即剩余染料 溶液)的透光率T值或吸光度E值. 注：一般谷类样品丙酰化反应和染料结合反应不得低于10℃，水稻样品还应在18~34℃下进行. 2 中华人民共和国国家标准 UDC633.1:543 .062 谷类籽粒赖氨酸测定法 GB4801-84 染料结合赖氨酸(DBL)法 Method for determination of lysine in cereal grains -Dye -binding lysine method 本标准适用于测定水稻、玉米、高粱、麦类等谷类籽粒的赖氨酸含量. 1原理 在H2左右缓冲体系中，样品蛋白质的碱性氨基酸（赖氨酸、组氨酸、精氨酸）可与偶氮磺酸染 料酸性橙12等摩尔结合，生成不溶性络合物，其染料结合量（摩尔数）相当于此三种碱性氨基酸的总 和.若另取一份样品，先用丙酸酐将蛋白质中赖氨酸的一氨基掩蔽（丙酰化作用），使之失去与染料 结合的能力，然后再与染料反应，所得染...
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