SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4820-2017 牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC检测方法 Detection method for bovine citrullinemia by PCR-DHPLC 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4820-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：吴晓薇、朱道中、刘志玲、刘中勇、李贺、马保华、段燕瑜、林志雄. I SN/T4820-2017 牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC检测方法 1范围 本标准规定了牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC的检测方法. 本标准适用了快速筛查牛群中隐性的牛瓜氨酸血症（参见附录A)基因携带者. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. CN牛瓜氨酸血症(Citrullinemia) PCR聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction) DHPLC变性高效液相色谱(Denaturing high-performance liquid chromatography) PBS磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution) TEAA三乙基铵醋酸盐(Triethylamine acetate SNP单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism) 4原理 变性高效液相色谱(DHPLC)是利用目标核酸片段PCR扩增产物，部分加热变性后，含有突变碱基 的DNA序列由于错配碱基与正常碱基不能配对而形成异源双链.因包含错配碱基的杂合异源双链区 比完全配对的同源配对区和固定相的亲和力弱，更易被从分离柱上洗脱下来，从而达到分离的目的. SNP的有无最终表现为色谱峰的峰形或数目差异，依据此原理可很容易从色谱图中判断出突变的碱基 片段. 5仪器设备和试剂耗材 5.1仪器设备 变性高效液相色谱分析仪. 核酸扩增仪. Ⅱ级生物安全柜. 恒温水浴锅. 高速台式离心机（转速可以达到12000r/min). 微量可调移液器(10μL、100μL、200μL、1000μL). ...
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