SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4822-2017 牛尿苷酸合酶缺乏症 荧光定量PCR检测方法 Detection method of deficiency of uridine monophosphate synthase by RT-PCR 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T4822-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：李红权、孙良娟、张娜、刘中勇、谢艳辉、吴晓薇、李家侨、周广彪、朱事康、朱道中、 马保华、刘志玲、林志雄、鱼海琼. SN/T4822-2017 牛尿苷酸合酶缺乏症 荧光定量PCR检测方法 1范围 本标准规定了牛尿苷酸合酶缺乏症荧光定量PCR检测的操作方法. 本标准适用于牛尿苷酸合酶缺乏症（参见附录A的监测、诊断和鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. Ct值 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(cycle threshold) DUMPS 尿苷酸合酶缺乏症(deficiency of aridine monophos phate synthase) RT-PCR 实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR) SNP 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism) 4试剂和与材料 4.1苯酚(C6H6O). 4.2三氯甲烷(CHCl3). 4.3异戊醇[(CH3)2CHCH2CH2ON 4.4苯酚-三氯甲烷-异戊醇：饱和过的重蒸酚：三氯甲烷：异戊醇按25：24：1的比例混合. 4.5蛋白酶K裂解液(10mg/mL):将100mg蛋白酶K溶解于10mL灭菌蒸馏水中，保存在一20℃ 待用，避免反复冻融. 4.6SDS溶液：用900mL水溶解200g电泳级SDS 加热至68℃助溶，加浓盐酸调节H值至7.2，加 水定容到1000mL 室温保存. 4.7DNA提取纯化试剂盒. 4.8荧光定量PCR试剂盒(Realtime PCR Master Mix) 购于试剂公司或其他等效试剂盒. 4.9灭菌ddH2O. 4.10引物和探针（浓度均为10μmol/L). Fl:5'-ttctgaatttgtgattggttttat-3’ RI:5'-cctcctgcttctaactgaactc-3' probe-W:5'-VIC-ctggctcCgagtaagca-BHQ-3' probe-M:5’-FAM-ctggctcTgagtaagca-BHQ-3’ ...
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