SN/T 5224-2019 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法 实时荧光PCR内标法.pdf

ICS07.100.30 X04 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5224-2019 出口食品中单核细胞增生 李斯特菌检验方法 一一实时荧光PCR内标法 Detection of Listeria monocytogenes in food for export-Real-time PCR with internal amplification control method 2019-12-27发布 2020-07-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5224-2019 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草. 本标准由中华人民共和国海关总署会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国杭州海关、上海交通大学、中国检验检疫科学研究院. 本标准主要起草人：李可、施春雷、王娉、史贤明、方莹、张晓峰、崔妍. I SN/T5224-2019 出口食品中单核细胞增生李斯特菌检验方法 一实时荧光PCR内标法 1范围 本标准规定了出口食品中单核细胞增生李斯特菌的实时荧光PCR内标方法. 本标准适用于出口食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB4789.30-2016食品安全国家标惟食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3定义、术语和缩略语 下列定义、术语和缩略语适用于本文件. 3.1定义和术语 3.1.1扩增内标internal amplification control IAC 扩增内标()是指添加到PCR反应体系中用以指示假阴性现象的一段人工构建DNA序列或 者是一段致病菌的看家基因序列.主要原理是：在荧光定量PCR中使用与目的基因相似的扩增内标， 它的两端引物结合序列与目的基因完全一致，但具有不同的探针结合序列，使之不能与目的基因的探 针结合，只能与内标探针结合.将扩增内标添加到PCR反应体系中，使之与目标基因序列共同进行 扩增，如果在反应体系中存在一些抑制因素，则扩增内标和目标序列的扩增都将受到抑制，从而达到 指示PCR反应假阴性的目的. 3.1.2C值cycle threshold C 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数. 3.2缩略语 PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链反应. DNA(deoxyibonuleic acid):脱氧核糖核酸. FAM(6-carboxyfluorescein):6-羧基荧光素. HEX(6-hexachlorofluorescein):6-羧基-2'，4 4'，5'，7 7-六氯荧光素琥珀酰亚胺酯. 1 ...