ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5279—2020 鳗鲡疱疹病毒感染检疫技术规范 Quarantine protocol for infection with Herpesvirus anguillae 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5279-2020 鳗鲡疱疹病毒感染检疫技术规范 1范围 本文件规定了鳗鲡疱疹病毒的PCR和荧光探针PCR检测方法. 本文件适用于鳗鲡疱疹病毒感染的检疫鉴定及其流行病学调查、诊断和监测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. HVA:鳗疱疹病毒(Herpesvirus anguillae) PCR:聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction) Tag酶：水生栖热菌DNA聚合酶(Thermus Aquaticus DNA Polymerase) 4HVA感染概述 鳗鲡疱疹病毒感染由鳗鲡疱疹病毒引起，该病毒的英文名称为Herpesvirus anguillae(HVA) 也 作Anguillid herpesvirus1(AngHVI).被感染的鳗细可不表现临床症状，产生的临床症状不具备典型特 性.HVA的流行病学、病原特征等参见附录A. 5试剂和材料 用水若非注明，应符合GB/T6682中一级水的规格.除另有规定，所用试剂均为分析纯. 5.1Taq酶(5U/L):-20℃保存，不要反复冻融. 5.2PCR引物(20Hmol/L):下列PCR引物可以特异性扩增HVA的一个大小为394bp的DNA片段. 5.2.1上游引物HVAPOLVPSD:5'-GTGTCGGGCCTTTGTGGTGA-3 5.2.2下游引物HVAPOL0OSN:5'-CATGCCGGGAGTCTTTTTGAT-3 5.3荧光探针PCR引物(10umnl/L) 5.3.1上游引物AngHV1.CapProt.F06:5'-TGCTCTTGGAGTCGGTTGATG-3 5.3.2下游引物AngHV1.CapProt.R06:5-CCGTGTGGGAAAAGACTATTTGA-3* 5.4荧光探针PCR Taqman探针(5Hmol/L):AngHV1.CapProt.pR06:5'-TCTGAAAACCCGCTCGCCCTGA-3’ 1 SN/T5279-2020 其5’端和3’端分别标记6-FAM和BHQ-1. 5.5荧光探针PCR反应混合液：为商业试剂，主要成分为AmpliTag Gold DNA Polymerase dNTPs 实时荧光PCR buffer.可采用同等效果的其他试剂. 6仪器和设备 6.1恒温水浴锅. 6.2台式冷冻高速离心机. 6.3PCR仪. 6.4电泳仪. 6.5凝胶成像仪. 6.6荧光PCR仪. 7HVA感染的诊断 7.1临床症状的诊断 HVA感染时，鳗鲡的群体间和个体间的临床症状有很大的不同，普遍存在的临床症状有胸鳍、 鳃盖、鳃丝出血.临床症状还可表现为体表黏液松弛、增生，继而脱落，体表出现黏液缺损斑块.随...
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