ICS65.020.01 CCS B16 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5333—2020 玉米霜霉病菌（非中国种） 检疫鉴定方法 RDetection and identification of Peronosclerospora spp.(non-Chinese) 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5333—2020 玉米霜霉病菌（非中国种） 检疫鉴定方法 1范围 本文件规定了爪哇霜霉病菌、菲律宾霜霉病菌、甘蔗霜霉病菌和高粱霜霉病菌4种玉米霜霉病菌 非中国种的检疫鉴定方法. 本文件适用于玉米、高粱和甘蔗等禾本科植物的植株及种子中玉米霜霉病菌（非中国种）的检疫 和鉴定. 2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4病菌的基本信息 学名：Peronosclerospora spp. 分类地位：藻菌界Chromista 卵菌门Oomycota 霜霉纲Peronosporea 霜霉目Peronosporales. 霜毒科Peronosporaceae 霜指霉属Peronosclerospora. 玉米霜霉病菌（非中国种）指霜指霉属(Peronosclerospora)中的爪哇霜霉病菌(P.maydis)、菲 律宾霜霉病菌(P.philippinensis)、甘蔗霜霉病菌(P.sacchari)和高粱霜霉病菌(P.sorghi) 它们专 性寄生于玉米、高粱和甘蔗等禾本科植物上，在热带和亚热带危害严重. 传播途径：病菌主要在野生寄主上越冬，翌年侵染玉米等寄主作物.病菌近距离传播主要靠染病 叶片上的分生孢子或卵孢子，远距离传播主要靠寄主植物插条、高粱种子、种子中夹带的病残体或新 鲜湿润的种子. 玉米霜霉病菌（非中国种）的其它信息参见附录A. 5方法原理 根据玉米霜霉病菌（非中国种）4种病原菌的形态学特征和分子生物学特性，利用通用引物和特 异性引物进行PCR扩增并测序比对的原理，对病菌进行综合检疫鉴定. 6仪器设备和主要试剂 6.1仪器设备 生物显微镜（具测量功能），体视显微镜，超净工作台，天平，高压灭菌锅，台式高速离心机， 1 SN/T5333-2020 pH计，低温冰箱、常规冰箱、水浴箱，PCR扩增仪，电泳仪，凝胶成像仪. 6.2主要试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯.席尔氏浮载剂，乳酚油，氢氧化钠，苯胺蓝，PCR缓冲液、 dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、Tag DNA聚合酶，dNTPs 通用引物ITS5/ITS4 特异性引物引 物Pssm-2/Pssm-3和特异性引物Pmly-1/Pmly-2. 7检疫鉴定方法 7.1症状检查 4种病菌在寄主植株上引致的症状近似.观察玉米、甘蔗和高粱叶片是否有褪绿色条斑，叶基部 是否变黄，叶背面是否有白色霉层（参见附录A). 检查挑取瘦小、霉变、畸形的种子，以及种子中夹带的病残体、高粱颖壳，观察是否有病斑， 病斑是否有霉层. 7.2形态学鉴定 对于有霉层的病斑，直接挑取病菌分生孢子囊和孢囊梗制片镜检，或用小块透明胶带粘取霉层 制片镜检.观测记录分生孢子囊和孢囊梗的形状、大小，分生孢子囊至少测量30个. 7.3组织透明检测 取病残体、种皮、种子的颖壳，在10%氢氧化钠中煮沸透明10-20min 苯胺蓝染色、镜检，观 察菌丝形态和卵孢子. 7.4分子生物学鉴定 7.4.1DNA提取 对于有霉层的病组织，直接搜集病菌提取DA;对于无霉层的病组织，取病变部位用液氮研磨， 然...
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