SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1557-2005 禽痘琼脂免疫扩散试验操作规程 Protocolof agargel immunodiffusion testforfowlpox 2005-02-17发布 2005-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局
中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 禽痘琼脂免疫扩散试验操作规程 SN/T 1557-2005 ￥ 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址.bzcbs. 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本880×12301/16印张0.5字数8千字 2005年5月第一版2005年5月第一次印刷 书号：1550662-16193定价6.00元 如有印装差错由本社发行中心调换 ：（010)68533533
SN/T1557-2005 前言 本标准的附录A为规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：张东林、温燕辉、林庆燕。
本标准是首次发布的出人境检验检疫行业标准。
SN/T 1557-2005 禽痘琼脂免疫扩散试验操作规程 1范围 本标准规定了禽痘琼脂免疫扩散试验操作方法。
本标准适用于禽痘病毒抗体的检测。
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（eqvISO3696：1987） 3器材与试剂 3.1器材 3.1.1平皿：平Ⅲ直径为90mm。
3.1.2微量加样器。
3.1.3塑料吸头。
3.1.4打孔器：内径4.0mm，孔间距3.0mm，7孔梅花样金属打孔器。
3.2试剂 3.2.1禽痘琼脂免疫扩散试验抗原和标准阳性血清。
3.2.2琼脂糖。
3.3溶液配制 pH7.20.01mol/L磷酸盐缓冲溶液及1%硫柳汞溶液配制方法详见附录A，试剂配制用水需满 足GB/T6682的要求。
3.4被检血清 无菌条件下静脉采血1mL左右，将血样进行血清分离后，保存于4C待检，若需长期保存，则置于 -20℃冰箱。
4操作步骤 4.1琼脂板制备 称取琼脂糖1.0g，加pH7.20.01mol/L磷酸盐缓冲溶液至100mL。
加热融化后，加人8.0g氯化钠，充分溶解后，加人1.0mL1%硫柳汞溶液（终浓度为0.01%）。
冷却至45℃～50℃，将洁净干燥、直径为90mm的灭菌平皿，放置于水平平台上，每个平皿加 18mL，厚度约为3.0mm。
凝固后盖严，把平皿倒置放人4℃冰箱中保存备用。
4.2打孔 反应孔现用现打。
从冰箱内取出琼脂板，用7孔一组的梅花形打孔器进行打孔（中间1孔，外周6 孔）（见图1)，孔径4.0mm，孔距3.0mm。
将孔中的琼脂糖轻轻挑出或吸出，勿伤及边缘或使琼脂层 脱离玻璃。
平皿中各孔排列见图2。
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SN/T1557-2005 图1平皿中梅花形7孔一组排列示意图 Q 图290mm平血中三组梅花形孔排列示意图 4.3封底 在酒精灯火焰上通过4次～6次加热平Ⅲ背面，使底部琼脂稍微融化。
4.4加样 结合上列图示，用微量加样器吸取抗原溶液滴人中央孔，标“+”的三孔加标准阳性血清，1、2、3孔 加被检血清，每孔均需加满，但不能溢出。
每加一个被检样品应换一个吸头。
4.5反应 加样完毕，室温静置10min，放入保湿盒内置22"C～26C反应，分别在24h、48h和72h观察并记 录结果。
5结果判定 5.1判定前提 将琼脂板置日光灯或侧强光下观察，在抗原孔与标准阳性血清孔之间出现一条清晰、致密的沉淀 线，抗原孔与阴性血清孔之间不出现沉淀线，说明对照成立，可进行结果判定。
5.2阳性 抗原孔与被检血清孔之间形成的沉淀线与阳性对照血清形成的沉淀线弯曲环联，判为阳性(见图3)。
注：标“+"孔为标准阳性血清，1、2、3孔被检血清呈阳性。
图3被检血清呈阳性示意图 2...
