SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1674-2014 代替SN/T1674-2011 锦鲤疱疹病毒病检疫技术规范 Quarantine protocol for Koi herpersvirus disease 2014-11-19发布 2015-05-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 30 刮涂查真伪 SN/T1674-2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准代替SN/T1674一2011《锦鲤疱疹病毒病检疫技术规范》. 本标准与SN/T1674一2011相比，主要技术变化如下： ——对采样进行了细化； —删除了电镜观察； —增加了临床症状； ——修改了细胞分离病毒的培养时间. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民 共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：史秀杰、王津津、杨俊兴、孙明君、郭明星、何俊强、于力、贾鹏、郑晓聪、兰文升、 刘荭. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： —SN/T1674-2005、SN/T1674-2011. I SN/T1674-2014 锦鲤疱疹病毒病检疫技术规范 1范围 本标准规定了锦鲤疱疹病毒病的临床诊断、病原分离、间接免疫荧光试验和聚合酶链式反应的检疫 技术规范. 本标准适用于锦鲤疱疹病毒病的检疫或监测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB19489实验室生物安全通用要求 3概述 锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease KHVD)是一种由疱疹病毒感染引起鲤鱼(Cyprinus carpio)及其各品种如锦鲤等的传染性和急性病毒血症，病原为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus KHV) (参见附录A) 4试剂和材料 4.1水：符合GB/T6682中一级水的规格. 4.2KHV参考株：由指定单位提供 4.3细胞系：可选用KF-1(锦鲤鳍条细胞系)或CCB(鲤鱼脑细胞系).用MEM培养液（见B.2)培养. 4.4 HEPES:4-羟乙基哌嗪乙磺酸. 4.5KHV参考抗血清（单克隆抗体）：由指定单位提供. 4.6酶标二抗：FITC标记的羊抗鼠IgG 按照说明书使用. 4.7引物 基于检测KHV TK基因建立PCR方法的引物序列为： KHV TK-F:5'-GGG TTA CCT GTA CGA G-3' KHV TK-R:5'-CAC CCA GTA GAT TAT GC-3' 扩增产物大小为410bp. 基于检测KHV Gray Sph基因建立PCR方法的引物序列为： KHV SphI-5F:5'-GAC ACC ACA TCT GCA AGG AG-3' KHV SphI-5R:5'-GAC ACA TGT TAC AAT GGT CGC-3' 扩增产物大小为292bp. 4.8无水乙醇：分析纯，使用前预冷到一20℃. 1 ...
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