SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3199—2012 兔巴氏杆菌病检疫技术规范 Quarantine protocol for Pasteurellosis in rabbit 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华，人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3199-2012 兔巴氏杆菌病检疫技术规范 1范围 本标准规定了兔巴氏杆菌病样品处理、实验室检验和检疫后处理的技术. 本标准适用于兔巴氏杆菌病的检疫. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 3疾病概述 参见附录A. 4初步诊断 参照附录A中的临床症状和病理变化作出初步诊断. 5病原分离和鉴定 5.1材料 5.1.1试剂：草酸铵结晶紫、革兰氏碘溶液、95%酒精碳酸复红、甲醇、瑞特氏染、美蓝染液、10%绵羊 全血、健康动物红细胞 5.1.21%蛋白胨水，配制方法见附录B中B.1 5.1.3血清肉汤，配制方法见附录B中B.2. 5.1.4马丁氏肉汤，配制方法见附录B中B.3. 5.1.510%血琼脂，配制方法见附录B中B.4. 5.1.6麦康凯琼脂，配制方法见附录B中B.5. 5.1.7靛基质试验试剂，配制方法见附录B中B.6. 5.1.8氧化酶实验用试剂，配制方法见附录B中B.7. 5.1.9糖发酵培养基，配制方法见附录B中B.8. 5.1.10运动性培养基，配制方法见附录B中B.9. 5.2病原分离 5.2.1病料的采集 5.2.1.1最急性和急性病例采集死亡兔只的肝、脾，心血；慢性病例采集局部病灶组织；对不新鲜或已 1 SN/T3199-2012 被污染的样品，可自骨髓中采集病料.采集病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环 通过烧烙表面插入组织或心血内取样. 5.2.1.2活兔，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插入鼻裂中取样. 5.2.2病料涂片镜检 5.2.2.1抹片的制备 用镊子夹持发生病变的肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或 涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块、用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹 成薄层. 5.2.2.2干燥 自然风干. 5.2.2.3固定 将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定. 5.2.2.4革兰氏染色 固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫，染色2min;水洗；加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min;水洗； 加95%酒精于抹片上脱色1min;加稀释碳酸复红复染30s;水洗；吸干；镜检. 本病原体为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，菌体大小为(0.2μm~0.4um)X(0.6μm~2.5μm) 单 个或成对存在，常有英膜. 5.2.2.5其他染色法 甲醇固定，按GB/T4789.28一2003中2.6或2.1规定进行，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的球 杆菌. 5.2.3接种培养基 将采集的病料接种于血清肉汤、马丁氏肉汤、10%绵羊血琼脂斜面、麦康凯琼脂平板，含10%绵羊 全血琼脂琼脂平板和含4%健康动物血清的血清琼脂平板. 将接种后的斜面或平板，置36℃~37℃，培养18h~24h 观察结果. 5.3病原鉴定 5.3.1病原形态 病原为多杀性巴氏杆菌，用肝脏组织或心血抹片可见...
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