SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2124-2013 代替SN/T2124—2008 大西洋鲑三代虫病检疫技术规范 Quarantine protocol for infection with Gyrodact ylus salaris 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2124-2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准参考了世界动物卫生组织(0IE)的《水生动物疾病诊断手册(2011版)》中2.3.03大西洋鲑 三代虫病的有关章节,并结合了国内外的文献资料报道以及起草单位多年的检疫工作经验. 本标准代替SN/T2124一2008《大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范》. 本标准与SN/T2124一2008相比,主要技术变化如下: —一—简化了形态学鉴定方法,不再将其作为种类判定的主要依据; 一删除了IGS序列PCR鉴定方法; ——增加大西洋鲑三代虫结构图,标注其后吸器的结构,增加虫体消化及基于钩镰的种类鉴定 方法. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共 和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局. 本标准主要起草人:吴绍强、林祥梅、刘荭、王彩霞、吕继洲、岳志芹、刘建、王建峰、张永宁、贾广乐、 张曼、邓俊花. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: -SN/T2124—2008. I SN/T2124-2013 大西洋鲑三代虫病检疫技术规范 1范围 本标准规定了大西洋鲑三代虫病检疫时的样品采集、形态学检查、聚合酶链反应(PCR)初筛以及种 类鉴定方法. 本标准适用于大西洋鲑三代虫病的检疫以及流行病学调查. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括的修改单)适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. ITS:扩增内部转录间隔区(internal transcribed spacer) COI:线粒体细胞色素氧化酶I基因(mitochondrial cytochrome C oxidase I) 4病原概述 大西洋鲑三代虫(Gyrodactylus salaris)是引起大西洋鲑三代虫病的一种淡水胎生寄生虫.从形态 上看,大西洋鲑三代虫与同属三代虫G.teuchis(主要寄生于褐鳟、大西洋鲑和虹鳟)和G.thymalli(主 要寄生于河鳟)十分相似,容易彼此混淆,具体情况参见附录A. 5材料 除另有规定外,所用化学试剂均为分析纯.试验用水要求达到GB/T6682中一级水的要求. 5.1苦味酸铵-甘油(APG)溶液:配制方法见附录B的B.1. 5.2软组织消化液、消化终止液:配制方法见B.2、B.3. 5.3裂解液:配制方法见B.4. 5.4引物:浓度为10mol/L 其序列如下: ITS-up:5'-TTTCCGTAGGTGAACCT-3’ ITS-Ip:5'-TCCTCCGCTTAGTGATA-3’ CO I-up:5'-TAATCGGCGGGTTCGGTAA-3' CO I-lp:5'-GAACCATGTATCGTGTAGCA-3' 5.5PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶、DNA Marker、电泳上样缓冲液等,均...