SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2344-2014 代替SN/T2344-2009 黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of cucumber green mottle mosaic virus 2014-11-19发布 2015-05-01实施 意 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 400215 刮涂查真伪 SN/T2344—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准代替了SN/T2344一2009《黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法》. 本标准与SN/T2344一2009相比，主要技术变化如下： 增加了“实时荧光定量RT-PCR方法”和“快速免疫层析检测”. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检 疫局. 本标准主要起草人：陈青、梁新苗、黄峰、廖富荣、陈细红、陈红运、林石明. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——SN/T2344—2009. I SN/T2344-2014 黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定的免疫学和分子生物学检测方法. 本标准适用于可能带有黄瓜绿斑驳花叶病毒的植物的种子、苗木及植物产品的检疫鉴定. 2黄瓜绿斑驳花叶病毒基本信息 学名：cucumber green mottle mosaic virus 缩写：CGMMV 分类地位：烟草花叶病毒属(Tobamoviras)的成员 CGMMV通过机械传播，也通过种子传播.嫁接等农事操作是田间病害流行的主要因素之一， CGMMV还可以经Cuscuta subinclusa 啤酒花菟丝子(C.lupuliformis)和C.campestris传毒，植株一 旦发病，如果未进行杀灭处理，土壤也可带毒，带毒土壤也可成为病害发生的侵染源. 详细资料参见附录A. 3方法原理 根据黄瓜绿斑驳花叶病毒与抗体之间的特异性反应，对瓜类叶片或种子进行ELISA检测；根据该 病毒基因组特性进行PCR特异性检测，通过电泳条带大小进行结果判定 4仪器设备与试剂 4.1仪器设备和用具 微量研磨仪、酶标仪、洗板机、微量天平（感量：0.O01g)、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、 高速冷冻台式离心机、水浴槽、H计、移液器(1000μL、200μL、20pL、2μL)、96孔酶标板、研钵等；防 虫温室. 4.2试剂 试剂和缓冲液见附录B、附录C、附录D、附录E 参见附录F、附录G. 5检测样品的制备 5.1种子样品制备 挑取畸形、不成熟种子播于灭菌土中，待长出3~4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植 株分组(10株为1组)并编号，采集的叶片分成2份，根据需要分别用于后续的试验. 也可以挑取畸形、不成熟的种子直接进行酶联测定和分子生物学检测. 1 ...
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