SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3170-2012 葡萄皮尔斯病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Xylella fastidiosa 2012-05-07发布 2012-11-16实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T3170-2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位:中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检 疫局. 本标准主要起草人:邓丛良、张凯、高文娜、吕玉峰、梁新苗、刘鹏. I SN/T3170-2012 葡萄皮尔斯病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进境植物检疫中葡萄皮尔斯病菌的检疫鉴定方法. 本标准适用于进境植物苗木、繁殖材料和植物产品的葡萄皮尔斯病菌的检疫鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括的修改单)适用于本文件. SN/T1860植物病毒免疫电镜检测方法 3原理 3.1葡萄皮尔斯病菌的分类地位 葡萄皮尔斯病菌学名Xylella fastidiosa Wells et al 1987 该属原核生物界(Procaryotae) 薄壁 菌门(Phylum Gracilicutes.) 木质部小菌属(Xylella). 3.2检疫鉴定依据 以病菌在寄主上的症状特点、病菌形态学特征及其培养特性病菌种的特征以及基因组序列作为葡 萄皮尔斯病菌的检疫鉴定依据,必要时辅助进行致病性测定(参见附录A). 4仪器设备、试剂及用具 4.1仪器、设备、用具 超净工作台、生物培养箱、电子天平、酶标仪、PCR仪、凝胶成像仪、水浴锅、高速冷冻离心机、高压 灭菌锅、透射式电子显微镜、冰箱、液氮罐、解剖刀片、白磁盘保湿盒、研钵、微量移液器(可调式范围: 2.5L~1000μL)、吸头(10pL、100L、1000μL)、离心管(1.5mL)、PCR管、酶联板. 4.2试剂和培养基 检验所需的药品均为分析纯. 检验中用到的试剂琥珀酸柠檬酸-磷酸盐缓冲液,其配制方法见附录B. 检验中用到的PD2培养基、CS2O培养基、PW培养基、SPW培养基,其配制方法见附录B. 5葡萄皮尔斯病菌的鉴定 5.1双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)检测 利用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法对样品进行初筛(见附录C) 若检测结果为阳性,需进行病原 1 ...