SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3457-2012 植物病毒分子生物学检测规范 Criterion on detection of plant virus by molecular biology 2012-12-12发布 2013-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 除伪 SN/T3457-2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫 局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北仑出入境检 验检疫局. 本标准主要起草人：梁新苗、邓丛良、郭立新、陈红运、周琦、边勇、汪万春、李桂芬、郑耘、朱水芳、 李建光. I SN/T3457-2012 植物病毒分子生物学检测规范 1范围 本标准规定了进出境植物检疫工作中植物病毒、类病毒的分子生物学检测方法与要求. 本标准适用于进出境植物及植物产品中植物病毒、类病毒的分子生物学检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 聚合酶链式反应polymerase chain-reaction;PCR 简称PCR技术.模板DNA经高温变性为单链，两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一 段互补序列发生退火，在DNA聚合酶的作用下似四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使退火引物得以 延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数 扩增. 3.2 反转录-聚合酶链式反应everse transcription/polymerase chain reaction;RT-PCR 简称RT-PCR 以提取组织或其他材料中的RNA为模板，采用Oligo(dT)、随机引物或特异性引 物，在反转录酶和适宜的反应条件下RNA被反转录成DNA 然后再以CDNA作为模板，进行PCR 扩增. 3.3 实时荧光PCR real-time fluoescence PCR 在常规PCR的基础上，在引物对所扩增序列段中，加人一条特异性的寡核苷酸荧光探针，探针两端 分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团.探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团 吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离， 从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DA链，就有一个荧光分子游离产生荧光信号， 实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步. 3.4 Ct值cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数. 1 ...
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