SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3884-2014 国境口岸蜱类携带新布尼亚病毒 SYBR Green荧光PCR检测方法 Detection of tick-borne novel Bunyavirus by SYBR Green PCR method at frontier port 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T3884-2014 国境口岸蜱类携带新布尼亚病毒 SYBR Green荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸蜱新布尼亚病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法，包括标本采集、处理、 检测程序、结果判定及报告. 本标准适用于国境口岸蜱携带发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的实验室检验. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1293国境口岸蜱类监测规程 WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 人间传染的病原微生物名录中华人民共和国卫生部2006 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 新布尼亚病毒new bunyavirus 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus SFTSV) 简称新布尼亚病毒，是我国新发现的一种布尼亚病毒，属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，为分节 段的负链RNA病毒.病毒颗粒呈球形，直径80nm~100nm 外有脂质包膜，表面有棘突.该病毒引 起新发传染病发热伴血小板减少综合征，临床上主要表现为发热、血小板和白细胞减少、消化道症状及 多脏器功能损伤. 3.2 SYBR Green荧光定量PCR法 在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性的掺入DNA双链后，发射 荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR 产物的增加完全同步. 4缩略语 下列缩略语适用于本文件. 4.1RT-PCR逆转录聚合酶链式反应.(reverse transcription polymerase chain reaction) 4.2Ct值循环阈值，每个反应管的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数.(cycle threshold) 4.3RNA核糖核酸.(ribonucleic acid) 1 SN/T3884-2014 4.4PBS缓冲液含0.5%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液. 5实验室生物安全要求 中华人民共和国卫生部发布的《人间传染的病原微生物名录》规定，布尼亚病毒危害程度分类为第 三类，有关布尼亚病毒的实验室操作应按照以下规定执行： 一布尼亚病毒培养和动物感染实验应在生物安全二级(BSL2或ABSL2)实验室内进行； 一未经培养的布尼亚病毒感染性材料的操作应在生物安全二级(BSL2)实验室内进行； 一—布尼亚病毒相关的灭活材料和无感染性材料操作可在生物安全一级(BSL1)实验室内进行； —布尼亚病毒感染性材料运输包装分类为B类（仅培养物为B类），UN编号为UN3373; —其他要求按GB19489和WS233进行. 6检测对象 6.1出入境交通工具、集装箱、货物等场所采集的游离蜱或从上述场所宿主体表采集的寄生蜱. 6.2口岸地区采集的游离蝉或从上...
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