SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3888-2014 入出境动物皮张携带鼠疫耶尔森氏菌 快速检测方法 Rapid detection of Yersinia pestis from entry-exit animal skins 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 !发布 SN/T3888—2014 入出境动物皮张携带鼠疫耶尔森氏菌 快速检测方法 1范围 本标准规定了人出境动物皮张携带鼠疫杆菌的样本采样、保存及反相间接血凝试验和聚合酶链反 应试验的快速检测方法. 本标准适用于人出境旱獭、狐狸、狼、猞猁、麝鼠、灰鼠等可能感染鼠疫杆菌的动物皮张及寄生物的 病原体检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 WS279鼠疫诊断标准 国务院令第424号病原微生物实验室生物安全管理条例 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 动物皮张animal skins 可能携带鼠疫杆菌的旱獭皮、狐狸皮、狼皮、猞猁皮麝鼠皮、灰鼠皮等. 4实验室条件及防护要求 4.1准则 检测标本的处理和保存应在BSL-2级以上实验室中进行.BSL-2级以上实验室的要求要符合 GB19489和《病原微生物实验室生物安全管理条例》中同级别实验室的要求，并按照以上两个文件的要 求来进行个人防护.检测方法主要参考WS279. 4.2个人防护 采用实验室二级防护标准. 4.3实验仪器设备 生物安全柜、DNA扩增仪、凝胶成像分析系统、电泳仪、高压灭菌器、电子天平、水浴锅、恒温箱、 V孔板、移液器、不锈钢剪刀、打孔器. 1 SN/T3888-2014 5样本的采集和保存 5.1梳检寄生物 在大白盆内（或1mX1m的白布单）梳检寄生物，将检到的寄生物置于样品管内保存. 5.2取样部位 选择待检皮张的头颈部、尾部、四肢各个部位，有血液、淋巴结附着部位优先采样. 5.3取样方法 每张皮张按头颈部、四肢、尾部不同部位分别取1cm2大小的样本6块，用10cm×15cm塑料封口 袋保存；血渍、淋巴结的部位用刀片刮取血渍，于10mL带盖离心管内保存. 5.4样本存放 采集到的样本放置于一20℃冰柜或低温冰箱中冷冻保存，待检. 5.5样本处理 5.5.1反相间接血凝试验(Reverse indirect hemagglutination assay RIHA)样品处理方法 粉碎样本，加生理盐水浸没，浸泡24h.吸取浸泡液1500r/min离心5min 吸取上清液，56℃灭 活30min后制成样液，备检. 5.5.2聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)试验样本处理方法 5.5.2.1取1g龙胆紫，先用2mL酒精溶解后，加蒸馏水至100mL 混匀，取此溶液10mL加人 90mL蒸馏水制备成1g/L龙胆紫液；取2gNaC1加入100mL蒸馏水中，取此液100mL加入1g/L 龙胆紫液0.5mL 混匀后，分装高压灭菌30min 配制成洗蚤液备用. 5.5.2.2粉碎样本，用双蒸水浸没，浸泡24h.吸取浸泡液1500r/min离心5min 吸取上清液，56℃ 灭活30min后制成样液，备检；蚤、蜱、螨等寄生物样本置于研蚤板U孔内，用洗蚤液反复清洗干净，弃 去清洗液，研磨后用生理盐水按照100μL/只蚤（螨）、500L/只蜱比例...
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