SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3903-2014 进境牛、羊包虫病检疫技术规范 Quarantine protocol for echinococcosis of entry cattle sheep and goats 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3903-2014 进境牛、羊包虫病检疫技术规范 1范围 本标准规定了进境牛、羊包虫病检疫时的形态学鉴定、组织病理学鉴定、ELISA检测以及PCR检 测的技术规范. 本标准适用于进境牛、羊等动物及其产品中包虫（即细粒棘球蚴）的检疫. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 过碘酸希夫反应periodic-acid-Schiff reaction;PAS 糖被强氧化剂过碘酸氧化后，形成多醛.多醛再与无色的品红硫酸复合物（即希夫试剂）结合，形成 紫红色产物.在结缔组织中出现PAS阳性的无细胞堆积层即为棘球. 4临床诊断 牛羊在轻度感染及感染初期通常无明显症状，严重感染时表现被毛逆立，消瘦，发育不良.寄生肺 部时有明显咳嗽，寄生在肝脏可引起消化不良等症状.但一般临床症状不明显. 5实验室检测 5.1组织病理学鉴定 5.1.1剖检 细粒棘球蚴主要寄生于牛或羊的肝、肺等部位，用手触诊或者剖开组织时可发现包囊.如在囊内或 育囊中发现原头节即可确诊为棘球呦.如结构不清，可进一步采用过碘酸希夫反应(PAS)进行确诊. 5.1.2形态学检查 细粒棘球蚴为包囊状构造，直径5cm~10cm 最大可达30cm 囊内充满淡黄色液体，可生成内源 性子囊以及原头蚴.原头蚴顶突上有两排小钩，钩的大小不同，第一排长22μm~45μm 第二排长 18μm~38μm(参见附录A). 检获的可疑包囊组织用4%甲醛固定，并采用过碘酸希夫反应进行确诊. 1 SN/T3903-2014 5.1.3 过碘酸希夫反应(PAS) 5.1.3.1主要试剂与设备 5.1.3.1.1高碘酸溶液：配制方法见附录B中B.1. 5.1.3.1.21%淀粉糖化酶溶液：配制方法见B.1. 5.1.3.1.3 Schiff溶液：配制方法见B.1. 5.1.3.1.4 亚硫酸氢盐溶液：配制方法见B.1. 5.1.3.1.5 Harris苏木素染液：配制方法见B.1. 5.1.3.1.6切片机. 5.1.3.1.7光学显微镜. 5.1.3.2试验步骤 5.1.3.2.1切取经过4%甲醛固定的可疑包囊1cm3~3cm3 用水冲洗后，用浓度分别为35%、50%、 70%、85%、95%、100%的梯度乙醇逐步脱水，根据包囊的大小调整每一步所需的时间(1h~3h) 每一 步至少1h 100%乙醇需要两次. 5.1.3.2.2经50%无水乙醇50%二甲苯至少30min后，再用二甲苯透明两次，每次至少30min. 5.1.3.2.3经50%二甲苯50%石蜡至少30min后，再用石蜡浸泡两次，每次至少30min. 5.1.3.2.4用石蜡包埋，切片，切片厚度约4m~6μm 用粘片剂固定于洁净的载玻片上烘干. 5.1.3.2.5用二甲苯脱蜡10min 再用50%无水乙醇50%二甲苯浸泡5min 然后用浓度分别为 100%、95%、85%、70%、50%、35...
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