SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3949—2014 塑料包装 有害物质双酚A的检测方法 抗原抗体结合法 Plastic package-Determination of harmful material bisphenol A- Conjuction of antigen and antibody method 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3949-2014 塑料包装有害物质双酚A的检测方法 抗原抗体结合法 1范围 本标准规定了塑料包装双酚A的抗原抗体结合测定方法的试剂和材料、仪器、试验步骤和结果 计算. 本标准适用于塑料包装双酚A的测定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法原理 塑料经过超声提取后获得的滤液用于后续的检测.在酶标板上固定一定量的双酚A偶联抗原，加 入样本溶液或双酚A标准品溶液后，接着加人一定量的双酚A特异性抗体，使待测抗原和固定抗原竞 争性地与溶液中游离的双酚A特异性抗体结合，充分洗涤未反应的抗体和抗原，再加入一定量的酶标 二抗（抗抗体）进行放大作用，充分洗涤后，加底物显色液显色.结果如待测抗原含量越多，与固相抗体 结合的抗体越少，酶标二抗的量就越少，显色越浅，两者呈负相关.此实验的条件是：固定抗原限量，抗 体定量，酶标二抗限量.固定抗原与待测抗原和抗体结合的位点相同，竞争性地与抗体结合. 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯.实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格. 4.1双酚A标准品（色谱纯，99%以上）. 4.2甲醇. 4.3牛血清蛋白. 4.4碳酸氢钠. 4.5碳酸钠. 4.6吐温20. 4.7磷酸氢二钠十二水合物. 4.8磷酸二氢钾. 4.9氯化钾. 4.10氯化钠. 4.11柠檬酸. 4.12醋酸钠. 4.13甘油. 1 SN/T3949-2014 4.14乙二胺四乙酸二钠. 4.15四甲基联苯胺. 4.16二甲基亚砜. 4.17甲苯. 4.18硫酸. 4.1930%双氧水. 4.20双酚A标准水溶液(0.2μg/L 1.0μg/L 3.0μg/L 10.0μg/L 20.0g/L):准确称取50.0mg双 酚A粉末，用蒸馏水溶解，以蒸馏水定容至50mL.之后配成双酚A质量浓度分别为0.2μg/L 1.0μg/L 3.0μg/L 10.0g/L 20.0μg/L的标准溶液. 4.21酶标二抗：HRP标记的羊抗兔IgG 4.22包被抗原双酚A-BSA(5.65mg/mL) 4.23双酚A多克隆抗体. 4.24包被液(pH=9.6):0.05mol/L碳酸盐缓冲液(Carbonate Buffer Saline CBS) 4℃保存.准确称 取碳酸钠1.59g;碳酸氢钠2.93g 溶于800L蒸馏水中，加热搅拌，待全部溶解后，加蒸馏水 至1000mL. 4.25PBS稀释液：磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Saline PBS) 4℃保存.准确称取氯化钠8g;氯 化钾0.2g;磷酸二氢钾KH2PO024g;磷酸氢二十二水合物Na2HPO12H2O2.9g 溶于800mL 蒸馏水中，加热搅拌，待全部溶解后，加蒸馏水至1000mL. 4.26洗涤液：1000 mL PBS稀释液加0.5 mL Tween...
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