SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3954-2014 国境口岸尼帕病毒RT-PCR和实时荧光 RT-PCR检测方法 Detection of nipah virus at frontier port by RT-PCR and real time fluorescence RT-PCR 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T3954-2014 国境口岸尼帕病毒RT-PCR和实时荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸尼帕病毒RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法检验的对象、检测方法及 结果报告. 本标准适用于国境口岸尼帕病毒的实验室检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（原中华人民共和国卫生部） 人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构管理办法（原中华人民共和国卫生部） 人间传染的病原微生物名录（原中华人民共和国卫生部，2006年） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 尼帕病毒Nipah virus;NiV 尼巴病毒Nipah virus;NiV 属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)亨德拉尼帕病毒属(Henipavirus) 单股负链RNA病毒，可引 起一种新型烈性人畜共患传染性疾病一尼帕病毒病(Nipah virus disease NVD) 严重威胁人类和猪、 马等动物的健康.尼帕病毒感染人后的潜伏期为1周~3周，在人群中有人传人的可能，人的临床表现 主要为严重的快速进行性脑炎，脑干功能失常（表现为高血压、心动过速），死亡率高达40%~70%.不 同患者发病的严重程度各异，多数以神经症状为主，也可以呼吸道症状为主，特征症状是颈部和腹部肌 肉痉挛，同时出现体温升高、头痛、嗜睡、呕吐、咳嗽、意识混乱，严重的昏迷、死亡. 3.2 逆转录聚合酶链反应reverse transcription polymerase chain reaction;RT-PCR 将RNA的逆转录(RT)和CDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.本标准采用一步法逆 转录聚合酶链式反应(RT-PCR).在一步法RT-PCR中，首先以RNA为模板，利用下游特异性引物， 在依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）的作用下转录合成互补DNA(CDNA) 该步称作“逆转录”；随 后，再以CDNA为模板，利用上游和下游特异性引物，在DNA聚合酶的作用下进行PCR循环扩增；最 终使RNA分子的某个特定区域（目的片段）被扩增达几百万倍. 1 SN/T3954-2014 3.3 实时荧光RT-PCR real-time fluorescence RT-PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性荧光探针，对反转录后PCR扩增的产物进行标记跟踪，利用荧 光信号累积实现实时在线监测整个PCR反应过程，结合相应的软件可以对结果进行定性和定量分析. 本标准所采用的荧光探针是TagMan水解探针.该探针为一段寡核苷酸分子，在5’端和3’端分别标 记荧光报告基团（如FAM)和荧光淬灭基团（如TAMRA).该探针可与PCR产物发生特异性杂交...
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