SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3962-2014 水仙迟季黄化病毒的检疫鉴定方法 Detection and identification of Narcissus late season yellows virus 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T3962-2014 水仙迟季黄化病毒的检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了水仙迟季黄化病毒检测的程序和方法. 本标准适用于进出境水仙中水仙迟季黄化病毒的检测. 2原理 水仙迟季黄化病毒的血清学和分子生物学特性是制定本检疫鉴定方法的主要依据.水仙迟季黄化 病毒的分类地位、寄主范围、病害症状、分布地区、传播途径、粒体形态、基因组等参见附录A. 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 高速冷冻离心机、电子天平(1/1000g)、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、一20℃低温冰箱和一80℃ 超低温冰箱、凝胶成像分析系统、PH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、超净工作台、酶 标仪等. 3.2用具 各种量程的可调移液器(1000gL、200pL、100L、20gL、10pL、2L)、PCR反应管、无RNase离 心管(1.5mL)、研钵、酶联板等. 3.3试剂 酶联板捕获抗原酶联免疫吸附测定法(plate-trapped antigen ELISA PTA-ELISA)试剂见附录B 巢式RT-PCR试剂见附录C. 4检测与鉴定 4.1 PTA-ELISA 具体方法见附录B. 4.2巢式RT-PCR 具体方法见附录C. 5结果判定与记录 5.1结果判定 当水仙迟季黄化病毒PTA-ELISA检测结果为阳性，且巢式RT-PCR检测结果也为阳性时，则判 1 SN/T3962-2014 定为检出水仙迟季黄化病毒. 当水仙迟季黄化病毒PTA-ELISA检测结果为阴性，且巢式RT-PCR检测结果也为阴性时，则判 定为未检出水仙迟季黄化病毒. 若水仙迟季黄化病毒仅PTA-ELISA或RT-PCR为阳性，则需进一步采用电镜鉴定或PCR产物序 列测定等方法进行鉴定. 5.2结果记录 记录好各项实验数据，包括样品来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人 和实验人员的签字.血清学检测结果保留吸光值的数据报告，分子生物学检测结果保留电泳照片. 6样品的保存 经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在一20℃~一80℃超低温冰箱中，并作好登记和标记 工作，以备复核用. 2 ...
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