SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4072-2014 梨衰退植原体检疫鉴定方法 Detection and identification of pear decline Phytoplasma 2014-11-19发布 2015-05-01实施 23 30 中华，人民共和国发布 别涂层查真伪 国家质量监督检验检疫总局 SN/T40722014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫 局、中国检验检疫科学研究院、福建农林大学. 本标准主要起草人：王念武、陈劲松、黄伙水、沈建国、张永宏、翁瑞泉、牟海青、胡方平. 1 SN/T4072-2014 梨衰退植原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了梨衰退植原体的检疫鉴定方法. 本标准适用于进出境梨树的果苗、组织繁殖材料及媒介昆虫中可能携带梨衰退植原体的检疫鉴定. 2术语与定义 下列术语和定义适用于本文件 2.1 聚合酶链式反应polymerase chain reaction;PCR PCR是在聚合酶的作用下，以DNA为模板，以dNTP为底物，以两条反向的引物对为起点，根据碱 基配对原则，按照DNA的核苷酸顺序，合成与模板互补的DNA链的过程，是一种体外基因扩增技术. 2.2 DNA阳性对照positive control 以含有梨衰退植原体的DNA提取液或是以携带有梨衰退植原体16 S rRNA序列的阳性克隆质粒 为模板. 2.3 DNA阴性对照negative control 以健康的梨树叶脉或枝条韧皮部提取的总DNA为模板 3梨衰退植原体基本信息 梨衰退植原体Pear decline phytoplasma属于软壁菌门(Tenericutes)、软球菌纲(Mollicutes)菌原 体目(Mycoplasmatales)、菌原体科(Mycoplasataceles)、植原体属(Phytoplasma)、苹果畸形组Apple proliferation group(16SrX). 其他信息参见附录A. 4方法原理 根据梨衰退植原体的16 SrRNA基因碱基序列信息，采用植原体16S-23 S rRNA通用引物和梨衰 退植原体特异性引物相结合的巢式PCR方法，对该植原体进行鉴定. 5仪器、用具和试剂 5.1仪器 PCR仪、高压灭菌锅、制冰机、高速冷冻离心机、离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、电泳 仪、凝胶成像系统、天平（感量：0.001g)、高温干燥箱、生物安全柜、水浴锅等. 1 ...
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