SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4097-2015 贝类派琴虫实时荧光PCR检测方法 Real-time fluorescent PCR quarantine protocol for Perkinsus sp.in shellfish 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 30 国家质量监督检验检疫总局 发布 利层麦真伪 SN/T4097-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：张雪、肇慧君、李叶、李振荣、贾赞. I SN/T4097-2015 贝类派琴虫实时荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了贝类中派琴虫的实时荧光PCR检测方法. 本标准适用于贝类组织中派琴虫的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 实时荧光PCR real-time fluorescent PCR 在普通聚合酶链反应的基础上加入一条特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一 个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团.探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时，Taq酶的5'-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统可 接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现荧光信号的累积与PCR产物形 成完全同步，达到实时定量的目的. 3.2 Ct值cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的值时所经历的循环数，也可称为p值. 4试剂和材料 4.11mol/L TrisCl(pH8.0)、0.5mol/L EDTA溶液(pH8.0)、SDS(10%).溶液配制见附录A. 4.2蛋白酶K溶液(20mg/mL). 4.3Tris饱和酚. 4.4三氯甲烷. 4.5异戊醇. 4.6无水乙醇. 4.7生理盐水. 4.810 X PCR buffer、25mmol/L MgCl2、2.5mmol/L dNTP、5U/pl.Tag酶. 4.910μmol/L上游引物、10μmol/L下游引物、10μmol/L探针. 4.10TE缓冲液(pH8.0). 1 ...
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