SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4276—2015 国境口岸鼠疫耶尔森菌荧光 PCR检测方法 Detection of Yersinia pestis in rodents by real-time PCR method at frontier port 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 !发布 SN/T4276—2015 国境口岸鼠疫耶尔森菌荧光 PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸鼠疫耶尔森菌荧光PCR检测方法的检测对象，标本的采集、处理、检测 程序. 本标准适用于国境口岸鼠疫耶尔森菌的荧光PCR检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T28940病媒生物感染病原体采样规程鼠类 GB/T28942病媒生物感染病原体采样规程蛋蚤 SN/T1240国境口岸鼠类监测规程 SN/T1292国境口岸蚤类监测规程 WS279鼠疫诊断标准 人间传染的病原微生物名录（卫生部） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 鼠疫耶尔森菌Yersinia pestis 俗称鼠疫杆菌，为革兰阴性短粗杆菌，菌体两端钝圆且浓染，亦易被苯胺染料着色，大小为 (0.5μm~1.0μm)X(1.0μm~2.0μm).一般分散存在，偶尔成双或呈短链排列，无鞭毛，不形成芽胞. 鼠疫耶尔森菌是鼠疫的病原菌，鼠疫是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病，人类鼠疫多为疫鼠的跳 蚤叮咬而感染，是我国法定的甲类传染病.鼠疫传染性强，病死率高，易酿成大流行.鼠疫耶尔森菌主 要累及皮肤和淋巴结，其次为败血症、肺炎、脑膜炎. 4缩略语 下列缩略语适用于本文件. PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) Ct值：循环阅值，每个反应管的荧光信号达到设定阙值时所经历的循环数(cycle threshold) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid) PBS缓冲液 1 SN/T4276-2015 含0.5%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液. 生理盐水 0.9%的氯化钠水溶液. 5实验室生物安全要求 按照《人间传染的病原微生物名录》规定，本方法中鼠疫耶尔森菌荧光PCR检测应在GB19489规 定的生物安全Ⅱ级(BSL-2)实验室内进行. 6检测对象 6.1国境口岸疑似鼠疫耶尔森菌感染者的临床样品. 6.2国境口岸可能携带鼠疫耶尔森菌的医学媒介生物样品. 6.3国境口岸疑似鼠疫耶尔森菌污染的环境样品. 7主要仪器设备 本方法使用的主要仪器如下 一实时荧光PCR仪； 一二级生物安全柜； ——高压灭菌器； —一70℃超低温冰箱（或液氮罐） 普通冰箱； 高速台式冷冻离心机（最高转速13800g以上； 微量可调移液器(10L、200L、1000μL)及配套的一次性带滤芯吸头； —水浴锅； 组织研磨器. 8试剂 本方法使用的主要试剂如下： 一无菌生理盐水或三蒸水； —Premix Ex TaqTM(Probe qPCR); 引物； 阳性对照； 阴性对照； 探针. 1)给出这一信息是为了方便本标准使用者，并不表示只认可该产品.如果其他等效产品具有相同的效果，则可使 用等效产品. 2 ...
SN/T 4276-2015 国境口岸鼠疫耶尔森菌荧光PCR检测方法.pdf
