SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4344-2015 杏褪绿卷叶植原体检疫鉴定方法 Detection and identification of Apricot chlorotic leafroll phytoplasma 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 4002315 别涂限查真伪 SN/T4344-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局. 本标准起草人：黄新、侯立华、郭欣硕、牟海青、赵文军、张琪、张琰、朱水芳、王有福. I SN/T4344-2015 杏褪绿卷叶植原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了杏褪绿卷叶植原体的检疫和鉴定方法. 本标准适用于进出境杏、桃及李子苗木中杏褪绿卷叶植原体的检疫和鉴定. 2杏褪绿卷叶植原体基本信息 学名：Candidatus Phytoplasma prunorum 异名：Apricot chlorotic leafroll phytoplasma;European stone fruit yellows phytoplasma;Apricot chlorotic leaf roll virus;Peach chlorotic leaf roll virus 分类地位：软壁菌门，柔膜菌纲，无胆甾原体目，无胆甾原体科，植原体候选属，16S双X-B植原体组. 传播途径：田间近距离扩散以媒介叶蝉(Fieberiella florii)和嫁接传播为主，远距离以无症带菌苗木 传播为主. 杏褪绿卷叶植原体的其他信息参见附录A. 3方法原理 杏褪绿卷叶植原体的生物学特性和基因序列等分子生物学信息是该检疫鉴定方法的依据，DAPI 荧光染色法和透射电子显微镜法在本标准中作为一种初步筛选植原体的方法；PCR技术与RFLP技术 结合作为鉴定杏褪绿卷叶植原体的准确方法. 4仪器设备和主要试剂 4.1仪器设备 PCR仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温 冰箱、常规冰箱、涡旋震荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统、透射电子显微镜、荧光显微镜. 4.2主要试剂 植原体细胞富集缓冲液(100mL):无水磷酸氢二钾1.67g 磷酸二氢钾0.41g 蔗糖10g 牛血清白 蛋白0.15g 聚乙烯吡咯烷酮2g 维生素C0.53g 用5mol/L的KOH调节pH值至7.6. DNA提取缓冲液：2%十六烷基三甲基溴化铵(50℃左右溶解)，1.4mol/L氯化钠，20mmol/L乙 二胺四乙酸，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0). 除另有规定外，试剂均为分析纯. 5病菌的鉴定 5.1症状检查 仔细观察寄主植物种苗、叶片等，感病植株典型症状是卷叶，叶片沿着从叶柄到叶尖的直线卷曲，叶 1 ...
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