CCS B 16 ICS 65.020.01 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T40194-2021 大麦条纹花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification ofBarleystripe mosaicvirus 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会
GB/T 40194-2021 大麦条纹花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本文件规定了大麦条纹花叶病毒的血清学和分子生物学检疫鉴定方法。
本文件适用于可能带有大麦条纹花叶病毒的植物及其产品的检疫鉴定。
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单)适用于 本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。
4大麦条纹花叶病毒基本信息 学名：Barley stripe mosaic virus 缩写：BSMV 异名：Barley false stripe virus、Barley mild stripe mosaic virus、Barley mild stripe virus、 Barley mosaic virus、Barley stripe mosaic hordeivirus、Barley very mild stripe mosaic virus、Oat stripe mosaic virus、Setripe mosaic virus 分类地位：马泰利病毒目（Martellivirales）植物杆状病毒科（Virgaviridae）大麦病毒属（Hordei- virus）成员。
大麦条纹花叶病毒的其他信息参见附录A。
5方法原理 大麦条纹花叶病毒的血清学特性和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据。
根据BSMV与抗体之 间的特异性反应，对植物样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA)；依据BSMV的基因组 特征进行RT-PCR、实时荧光RT-PCR检测；通过这些方法的有效组合，判断样品是否带有BSMV。
6仪器用具与试剂 6.1仪器设备 6.1.1电子天平（感量0.001g)。
6.1.2高速冷冻离心机。
GB/T 40194-2021 6.1.3微型瞬时离心机。
6.1.4普通冰箱。
6.1.5超低温冰箱（一80°℃）。
6.1.6制冰机。
6.1.7涡旋振荡器。
6.1.8磁力搅拌器。
6.1.9高压灭菌锅。
6.1.10 pH计。
6.1.11超净工作台。
6.1.12实时荧光定量PCR仪。
6.1.13 PCR仪。
6.1.14微波炉。
6.1.15电泳仪。
6.1.16电泳槽。
6.1.17凝胶成像分析仪。
6.1.18洗板机。
6.1.19酶标仪。
6.1.20酶联板。
6.1.21 可调移液器(2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)。
6.1.22可调移液器头。
6.1.23 Eppendorf管。
6.1.24研钵。
6.1.25微型磨。
6.2试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中相关规定。
6.2.1DAS-ELISA检测试剂，制备按附录B中B.1执行。
6.2.2RT-PCR检测试剂，制备按附录C中C.1执行。
6.2.3实时荧光RT-PCR检测试剂，制备按附录D中D.1执行。
7检测样品的制备 7.1种子 挑取畸形、不成熟种子播于灭菌土中，待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号；未表现症状 的植株分组（10株为1组)并编号，采集的未表现症状的叶片分成2份；用于酶联测定和分子生物学检 测。
也可以挑取畸形、不成熟的种子直接进行酶联测定和分子生物学检测。
7.2植株 对于有症状(如叶片条纹、花叶、褐色细小斑点等)的植株，每个植株编号并进行单株检测。
没有症 状的分组并编号后按组进行检测，分组方法和检测方法同7.1。
7.3植物产品 植物产品有症状的部分（如条纹、花叶等）单独编号检测。
没有症状或无法观察症状的植物产品，分 2
GB/T 40194-2021 组编号，分组方法和检测方法同7.1。
8检测鉴定 8.1双抗体夹心酶联免疫吸附测定 包被抗体后，再把制备的样品上清液加入已包被BSMV抗体的酶联板中，进行DAS-ELISA检测。
每个样品平行加到两个孔中。
健康的植物组织作为阴性对照，感染BSMV的植物组织作为阳性对...
