ICS07.080 B47 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3677-2020 家蚕微孢子虫荧光定量PCR 检测方法 Real time PCR method for detection of Nosema bombycis 2020-08-26发布 2021-01-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3677-2020 全国农业品标准 前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起 公共服务平台 本标准由农业农村部种植业管理司提出 食典通 本标准由全国桑蚕业标准化技术委员会(SAC/TC437)口 本标准起草单位：江苏科技大学、中国农业科学院蚕业研究所、苏州大学、西南大学、农业农村部蚕桑 产业产品质量监督检验测试中心（镇江）. 本标准主要起草人：吴萍、沈中元、郭锡杰、张少伦、贡成良、潘敏慧、陈涛、商琪. I NY/T3677-2020 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法 1范围 本标准规定了家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的实时荧光定量PCR检测方法. 本标准适用于家蚕蚕卵及家蚕幼虫组织中微孢子虫的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.一凡是注日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（色包 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 的修改单适HNC 3术语和定义 ND 下列术语和定义适用于平 3.1 LUS rRNA基因LS rRNA gene 家蚕微孢于虫的大亚核糖体rRN八Large subur面i山osonal LUS)基国 3.2 Ct值cycle thresheld RESEARCH 每个管内的荧光号达到设定的值时所经历的循环 3.3 FTA卡滤膜片 Tlinders technology asseciates card 弗林德斯技术联合长 膜，一种特制的滤红可结合核酸，维持科品中式的完整性. 4原理 Z 根据家蚕微孢子虫的（ys rR基因的保守序列设计特异性物进行3扩增反应.利用荧光信 号伴随目的PCR产物的增血增强的原理.收集CR扩增过程的荣光信号他根据C值判断供试样品 是否含有家蚕微孢子虫 5试剂与材料 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定. 5.1Tris-HCl(1mol/L pH8.0):称取12.10 g Tris碱至烧杯中，加入90mL超纯水溶解，加入适量浓 HCl调pH至8.0，定容至100mL 高压灭菌，室温保存. 5.2EDTA(0.5mol/L pH8.0):称取18.61 g EDTA溶于90mL超纯水中，加入适量NaOH调节pH 至8.0，定容至100mL 高温灭菌后保存. 5.3TE缓冲液：分别量取5.1溶液5.0mL、5.2溶液1.0mL于烧杯中，加入400mL超纯水均匀混合 后，定容至500mL 高压灭菌，室温保存. 5.4TE1缓冲液：分别量取5.1溶液5.0mL、5.2溶液0.1mL于烧杯中，加入400mL超纯水均匀混 合后，定容至500mL 高压灭菌，室温保存. 5.530%KOH溶液：称取30.00gKOH至烧杯中，缓慢加人超纯水搅拌溶解后，定容至100mL 高压 灭菌，室温保存. 5.6玻璃珠（直径1.0mm). 1 ...
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