ICS65.020.01 B15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3629-2020 马铃薯黑胫病菌和软腐病菌 PCR检测方法 Detection of pathgenic bactera for potato blackleg and soft rot by PCR method 2020-07-27发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3629-2020 全国业食品标准 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则 前公共服冬平台 食典通 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院马铃薯研究所、龙科雪川农业发展（克山）有限公司、农业农村 部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心（哈尔滨）、中国农业大学、西南大学. 本标准主要起草人：魏琪、胡林双、董学志、白艳菊、吕典秋、王晓丹、彭亚清、闵凡祥、宿飞飞、范国权、 杨帅、王文重、郭梅、王绍鹏、刘振宇、高云飞、张抒、万书明、刘尚武、张威、邱彩玲、高艳玲. I NY/T3629-2020 马铃薯黑胫病菌和软腐病菌PCR检测方法 1范围 本标准规定了马铃薯黑胫病菌和软腐病菌的PCR检测方法，其致病菌株主要包括黑腐果胶杆菌 (Pectobacterium atrosepticum Pa)、胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(P.carotovorum subsp.carotov- rum Pcc)和菊迪克氏菌(Dickeya chrysanthemi Dch)3种. 本标准适用于马铃薯试管苗、原原种和田间马铃薯植株、块茎等组织中马铃薯黑胫病菌和软腐病菌的检测. 2规范性引用文件 下列对于作的本适用于木文件 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 GB/T6682分析实验室水规格和试验方法 ANG 3原理 RA 本标准采用聚合酶键反应(polymerase chain reaction PCR方法检测马铃黑胫病菌和软腐病菌. 其原理是：马铃薯黑胫病和软腐病的致病菌基因组包含4506个基因，某些关键区域在进化上较为保守， 可代表该病原菌特异性和唯一性，利用致病菌相应的特异性引物，以基因组DNA为模板，在Tag DNA聚 合酶的作用下进行PR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的片段从而达到鉴定马铃薯 黑胫病菌及软腐病菌的目的 人 全 4试剂与材料 以下试剂除有规定外，均使用分析纯试剂；水为符合GB/T6682中规定的一级水. 4.1植物基因组DN提取试剂盒 4.2 Tag DNA聚合酶(5U/uL) 4.3dNTP混合物（各 mmol/E) 4.410XPCR缓冲液（含M Y3⊥N3 4.5无水乙醇. 4.650XTAE电泳缓冲液. 4.71×TAE电泳缓冲液 量取50XTAE电泳缓冲液20mL 加水定容至1000mL 4.875%乙醇 量取无水乙醇75mL 加水定容至100mL. 4.9溴化乙锭溶液(10mg/mL)或GelRed核酸凝胶染料（溴化乙锭替代物） 称取溴化乙锭200mg 加水溶解，定容至20mL. GelRed核酸凝胶染料按照商品推荐稀释浓度使用. 4.101.0%琼脂糖凝胶板 称取琼脂糖1.0g 加入1XTAE电泳缓冲液定容至100mL 微波炉中加热至琼脂糖融化，待溶液冷 却至50℃~60℃时，加溴化乙锭溶液或GelRed核酸凝胶染料5uL 摇匀，倒入制胶板中均匀铺板，凝固后 取下梳子，备用. 4.11引物缓冲液 用水将上、下游引物分别配制成工作浓度为10ng/uL的溶液. 1 ...
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