ICS67.120 B45 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3309-2018 肉类源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法 Identification of animal-derived materials in meat- Qualitative realtime PCR method 2018-12-19发布 2019-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3309—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出. 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口. 本标准起草单位：山东省农业科学院生物技术研究中心、山东省食品药品检验研究院. 本标准主要起草人：步迅、张全芳、刘艳艳、范阳阳、霍胜楠、张卉、马德源、卞如如、陈杰、杨雪、李燕、 杨连群. I NY/T3309-2018 肉类源性成分鉴定实时荧光定性PCR法 1范围 本标准规定了对羊（绵羊、山羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、猪和大鼠9种动物源性 成分进行鉴定的实时荧光PCR法. 本标准适用于生鲜肉、冷冻肉及肉制品中羊（绵羊、山羊）、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、 猪和大鼠9种动物源性成分的鉴定 本方法检出限为1%. 2规范性引用文件 ARD PUBLISH 下列文件对于木文件的应用是必不可少的凡是注日期的用文件仅注日期的版本适用于本文 行新（包括的修改单 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9695.19 肉方肉制品取样方法 GB/T27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 农业部2406号公 强 7 2016转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 RCH 3.1 实时荧光PCR -qualitative realtime-PCR 在PCR反应体系中加人荧光基因，利用荧光信号积累实时监控个PCR进程了对未知模板进行定 性或定量分析. 3.2 C值cycle threshold Y3⊥N 每个反应管内的荧光信号达到设定的阀值时所经历的循环数 4原理 根据线粒体16SDNA基国在不同物种间保守区设计通用引物，在可变区设计物种特异性探针，采 用TaqMan实时荧光PCR技术进行扩增，根据PCR扩增反应的荧光信号及循环阀值，判定羊（绵羊、山 羊)、狐狸、鸡、牛（普通牛、黄牛）、马、鸭、水貂、猪和大鼠9种动物源性成分. 5试剂或材料 除另有规定外，仅使用分析纯试剂. 5.1水：GB/T6682 一级. 5.2生理盐水：称取0.85 g NaCl加20mL水溶解，然后加水定容至100mL 103.4kPa蒸汽压(121℃) 条件下灭菌20min. 5.31mol/L Tris-HCl(pH6.4)溶液：称取12.1 g Tris置于100mL烧杯中，加入80mL水，用浓HCl 调节pH至6.4，加水定容至100mL 103.4kPa蒸汽压(121℃)灭菌20min 室温保存待用. 1 ...
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