ICS07.080 B47 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3421-2019 家蚕核型多角体病毒检测 荧光定量PCR法 Detection of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus-Real time PCR method 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3421-2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业农村部种植业管理司提出. 本标准由全国桑蚕业标准化技术委员会(SAC/TC437)归口. 本标准起草单位：江苏科技大学、西南大学、中国农业科学院蚕业研究所、苏州大学、华南农业大学、 农业农村部蚕桑产业产品质量监督检验测试中心（镇江）. 本标准主要起草人：吴萍、潘敏慧、郭锡杰、贡成良、孙京臣、董战旗、陈涛、侯启瑞、商琪. I NY/T3421-2019 家蚕核型多角体病毒检测荧光定量PCR法 1范围 本标准规定了家蚕核型多角体病毒(Bombyz mori nucleopolyhedrovirus BmNPV)的实时荧光定 量PCR检测方法. 本标准适用于家蚕核型多角体病毒的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必的P儿是显以期 用文件，仅注日期的版本适用于本文 本文件. 件.凡是不注日的引用文，其最就《括的修改单 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用予本文件 3.1 gp64基因gp64geh 杆状病毒囊膜蛋自基因，编码出芽型病毒子囊膜融合蛋前GP64. 4缩略语 5 RESEARCH 下列缩略语适用手本文件 BmNPV:家蚕核型多角体病毒(meri nucleopolyhedrovirus) Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的间值时所经历的循环数(Cycle threshold) dNTPs:脱氧核t磷酸混合液(deoxyribonuclcoside1 Tiphosphate mrixture由4种脱氧核糖核 苷酸dATP、dTTP、dGTP和dCTP等量混合而成的溶液 PBS:磷酸缓冲盐浴(phosphate bulfer saline) PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) 3⊥N SDS:十二烷基磺酸钠sodiun dodecyl sulfate 5原理 利用荧光信号伴随目的PCR产物的增加而增强的原理，收集PCR扩增过程的荧光信号值，根据Ct 值判断供试样品是否含有家蚕核型多角体病毒.根据BmNPV gA64基因的保守序列设计特异性PCR 引物进行PCR扩增反应. 6试剂与材料 6.120%SDS:称取20gSDS溶解于200mL烧杯中，加入80mL水，60℃水浴加热并用玻璃棒充分搅 拌至溶解，定容至100mL.高压灭菌后，置于4℃冰箱保存备用. 6.26mol/LNaC1:称取351 g NaCl放入容量为1L的烧杯中，加人800mL水，玻璃棒充分搅拌至溶 解，定容至1L.高压灭菌后，置于4℃冰箱保存备用. 6.3蛋白酶K20mg/mL:称取200mg蛋白酶K加入到9.5mL水中，轻轻摇动，至蛋白酶K完全溶 解，加水定容至10mL 分装成小份置于一20℃冰箱保存备用. 1 ...
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