ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T34757-2017 猪流行性腹泻 病毒RT-PCR检测方法 Porcine epidemic diarrhea-RT-PCR for detecting virus acid 2017-11-01发布 2018-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 别层查真伪 GB/T34757-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：东北农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、河南牧业经济学院、河南农业 大学. 本标准主要起草人：李一经、邵卫星、魏荣、宋建德、姜艳平、袁丽萍、唐丽杰、乔薪瑗、崔文、徐耀辉、 吴发兴、张志、孙映雪、魏战勇、李晓成. I GB/T34757-2017 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的仪器、试剂、样品的采集和处理、RT-PCR程 序、电泳及结果判定的技术要求. 本标准适用于快速检测猪临床样品（猪小肠和新鲜粪便）或细胞培养物中猪流行性腹泻病毒核酸. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. AMV:鸟类RNA病毒反转录酶(avian myeloblastosis virus) bp:碱基对(base pair) DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid) dNTPs:4种脱氧核糖核苷三磷酸混合物(deoxyribonucleoside triphosphates) PBS:磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline buffer) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) RRI:RNA酶抑制剂(rnase ribonuclease inhibitor) Taq酶：Tag DNA聚合酶(Tag DNA polymerase) 4仪器 4.1PCR扩增仪. 4.2高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000r/min以上. 4.3组织研磨器或者研钵. 4.4冰箱2℃~8℃冰箱和一70℃以下超低温冰箱. 4.5核酸电泳仪和水平电泳槽. 4.6微量移液器量程分别0.2gL~2gL、1gL~10L、10L~100pL、20gL~200L和100L~ 1000μL的移液器，并配备与移液器相匹配的吸头. 4.7高压灭菌锅. 4.8凝胶成像系统（或紫外透射仪）. 1 ...
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