NY/T 1949-2010 隐孢子虫卵囊检测技术 改良抗酸染色法.pdf

ICS11.220 B41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1949-2010 隐孢子虫卵囊检测技术改良抗酸染色法 Modified acid-fast staining technique for detection of Cryptosporidium spp oocysts 2010-09-21发布 2010-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1949—2010 前言 本标准遵照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：南京农业大学、中国农业科学院上海兽医研究所. 本标准起草人：黄克和、陈甫、陈兆国. I NY/T1949-2010 隐孢子虫卵囊检测技术改良抗酸染色法 1范围 本标准规定了改良抗酸染色法(MAFS)检测隐孢子虫卵囊的操作技术和结果判定要求. 本标准适用于猪、牛、羊、兔、犬、鸡和鸭等动物（新鲜粪便样品或直肠采样）隐孢子虫感染的诊断与 流行病学调查. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 中华人民共和国国务院令2004年第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》 农业部公告2003年第302号《兽医实验室生物安全管理规范》 3试剂和器械 3.1试剂 3.1.1牛血清，一20℃保存. 3.1.2隐孢子虫卵囊，2.5%重铬酸钾溶液中4℃保存. 3.1.3饱和蔗糖漂浮液或饱和盐水（见附录A). 3.1.4改良抗酸染色液（见附录A). 3.1.50.1mol/LPBS(见附录A). 3.1.65%重铬酸钾溶液（见附录A). 3.1.710%硫酸（见附录A). 3.1.8香柏油、二甲苯. 3.2器械 3.2.1普通生物显微镜. 3.2.2漩涡混匀器. 3.2.3微量移液器：5L、200L、1000pL. 3.2.4微量移液器头若干. 3.2.5载玻片及盖玻片若干. 3.2.6离心机（最高转速5000r/min 最大相对离心力3000g)与离心管(20mL、50mL 带盖）. 4卵囊浓集与涂片 4.1样品的保存和运送（见附录B) 4.2卵囊浓集法 4.2.1饱和蔗糖溶液漂浮法 4.2.1.1穿上防护服，戴上一次性手套.取1g~2g待检样品（如成形的粪便，包括粪便表面的和内部 的部分；如粪便是液体，可以混匀后取1mL~2mL加入试管)加40 mL PBS 研磨后经80目铜筛过滤 1 ...