ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2743-2015 甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程实时 荧光定量PCR法 Technical regulations for inspection and quarantine of Xanthomonas albilineans (Ashby )Dowson-Real time PCR method 2015-05-21发布 2015-08-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2743-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业部种植业管理司提出. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)归口. 本标准起草单位：农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室、农业部甘蔗及制品质量监督检验 测试中心、国家甘蔗工程技术研究中心. 本标准主要起草人：许莉萍、王恒波、阙友雄、黄国强、郭晋隆、苏亚春. I NY/T2743—2015 甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程实时荧光定量PCR法 1范围 本标准规定了甘蔗白色条纹病菌实时荧光定量PCR检测方法. 本标准适用于甘蔗种茎、种苗以及甘蔗或其他植物组织中的甘蔗白色条纹病菌(Xanthomonas al- bilineans)的检验检疫与检测.本标准中PCR等缩略语参见附录A.甘蔗白色条纹病菌有关信息参见 附录B. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T28067甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 hrpB基因hrpB gene 植物病原细菌的一种过敏性反应和致病性基因(hypersensitive reaction and pathogenicity gene hrp)参与和介导过敏性反应(hypersensitive response HR)的发生，与植物病原细菌致病性密切相关. hrpB基因是甘蔗白色条纹病菌的特异致病基因，编码细菌的类型Ⅲ蛋白分泌系统(typeⅢprotein se- cretion system TTSS) 通过该分泌途径，将细菌产生的诱导植物致病的蛋白，释放到胞外或宿主细胞 中，从而诱发宿主的各种效应. 4原理 利用荧光信号伴随着目标序列PCR扩增产物的增加而增强的原理，通过收集PCR扩增过程的荧 光信号值，即可判断试样是否带有目标序列.为此，在克隆甘蔗白色条纹病菌特异性致病基因hrpB全 长序列基础上，根据序列信息设计了PCR引物与探针，筛选获得特异性引物与探针，建立了一种基于 hrpB基因检测甘蔗白色条纹病菌的实时荧光定量PCR方法. 5试剂 除非另有规定，在分析中仅使用分析纯试剂，实验用水符合GB/T6682的二级水指标，其中涉及 PCR的用水要求达到一级水指标. 5.1氢氧化钠(10mol/L)溶液：在160mL水中加入80 g NaOH 溶解后加水定容至200mL 塑料瓶中 保存. 5.2EDTA溶液(500mmol/L pH8.0):称取二水乙二铵四乙酸二钠(Na2EDTA2H2O)18.6g 加 入70mL水中，加热至完全溶解后，冷却至室温，用10mol/L NaOH溶液调pH至8.0，加水定容至100 mL.在121℃条件下灭菌20min. 5.3Tris-HCl溶液(1mol/L pH...
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