ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2811-2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术 规范 Molecular detection for pathogen of Corynespora leaf fall disease of rubber tree 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2811-2015 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业部农垦局提出. 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口. 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所. 本标准主要起草人：谢艺贤、漆艳香、张欣、蒲金基、张贺、陆英、喻群芳、张辉强. I NY/T2811-2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术规范 1范围 本标准规定了橡胶树棒孢毒落叶病病原菌(Corynespora cassiicola)的术语和定义、检测方法、结果 判定、样品保存等技术要求. 本标准适用于橡胶树的棒孢霉落叶病病原菌的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 橡胶树棒孢霉落叶病：corynespora leaf fall disease of rubber tree 由多主棒孢毒[Corynes pora cassiicola(Berk.et Curt.)Wei]引起的一种为害橡胶树叶片和嫩梢 的真菌病害.该病害病原菌的学名、形态特征及其危害症状参见附录A. 4检测方法 4.1原理 根据橡胶树棒孢霉落叶病病原菌核糖体基因内转录间隔区(DNA-ITS)特有碱基序列设计特异 性引物进行PCR扩增.依据是否扩增获得预期272bP的DNA片段，判断样品中是否携带橡胶树棒孢 霉落叶病病原菌. 4.2仪器 显微镜(10X40倍)、高压灭菌锅、高速冷冻离心机（最大离心力25000×g)、PCR扩增仪、电泳仪及 紫外凝胶成像仪等. 4.3试剂及配制方法 4.3.1 1 mol/L Tris-HCI(pH 8.0) 称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris 优级纯)溶解于800mL一级超纯水中，用盐酸(HCl 分析 纯)调pH至8.0，加超纯水定容至1000mL.分装后高温灭菌(121℃)20min 4℃或室温保存备用. 4.3.2 10 mol/L NaOH 称取80.0g氢氧化钠(NaOH 分析纯)溶解于160ML一级超纯水中，溶解后再加一级超纯水定容 到200mL 4.3.3 1 mol/L EDTA-Naz(pH 8.0) 称取372.2g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na2 优级纯)，溶解于70mL一级超纯水中，再加人适量 NaOH溶液(4.3.2)，加热至完全溶解后，冷却至室温，再用NaOH溶液(4.3.2)调pH至8.0，加超纯水 定容至100mL.分装后高温灭菌(121℃)20min 4℃或室温保存备用. 4.3.4CTAB提取液(pH8.0) 1 ...
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