ICS11.220 B41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 Indirect ELISA for detection of antibodies against Porcine parvovirus 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2840-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心. 本标准主要起草人：陈义平、南文龙、周洁、陆明哲、魏荣. I NY/T2840-2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法. 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告[2003第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： PPV:猪细小病毒Porcine parvovirus ELISA:酶联免疫吸附试验Enzyme-linked immunosorbent assay OD:光密度optical density r/min:转/分钟rotations per minute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因，用pET-32a表达载体进行原核表达，亲和层析法 纯化重组蛋白.获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL 纯度应≥95%.具体过程见附录A. 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头，用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫，间隔3周免疫2次，第二次免疫1 个月后开始采血分离血清，用血凝抑制试验测定其抗体效价.当抗体的血凝抑制效价达到1：1024时 采血分离血清，将血凝抑制效价为1：1024的阳性血清用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为 阳性血清对照. 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清，经血凝抑制试验检测，结果为猪细小病毒 抗体阴性，用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为阴性血清对照. 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B.2、B.3、B.4、B.5、B.6、B.7. 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器(200μL、1000uL)、多道移液器(200L)、酶标板、 酶联免疫检测仪等. 1 ...
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