ICS11.220 B41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2841-2015 猪传染性胃肠炎病毒RT-nPCR检测方法 Method of detecting transmissible gastroenteritis virus by RT-nPCR 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2841-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口(SAC/TC181) 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、东北农业大学、河南农业大学、河南牧业经济 学院. 本标准起草人：邵卫星、魏荣、李晓成、李一经、黄耀华、魏战勇、徐耀辉、吴发兴、张志、刘爽、董亚琴、 孙映雪、李卫华、王树双、黄保续. I NY/T2841-2015 猪传染性胃肠炎病毒RT-nPCR检测方法 1范围 本标准规定了检测猪传染性胃肠炎病毒RT-nPCR方法的技术要求. 本标准适用于检测疑似感染猪传染性胃肠炎病毒的猪的新鲜粪便、小肠组织及肠内容物和细胞培 养物中的猪传染性胃肠炎病毒的核酸，可作为猪传染性胃肠炎的辅助诊断方法和细胞培养物中猪传染 性胃肠炎病毒的鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法. 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： AMV:禽成髓细胞瘤病毒avian myeloblastosis virus RT-nPCR:反转录一巢式聚合酶链式反应reverse transcriptase一nested polymerase chain reac tion RNA:核糖核酸ribonucleic acid DEPC:焦碳酸二乙酯diethypyrocarbonate PBS:磷酸盐缓冲液（配方见附录A.1)phosphate-buffered saline buffer Taq酶：Taq DNA聚合酶Taq DNA polymerase dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸deoxyribonucleoside triphosphates bp:碱基对base pair 4试剂 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的灭菌双蒸水或超纯水.提取 RNA所用试剂均须使用无RNA酶水配制，分装的容器需无RNA酶. 4.1磷酸盐缓冲液：配方见附录A.1. 4.2RNA提取试剂：Trizol LS. 4.3氯仿（警告：危险）. 4.4异丙醇. 4.575%的乙醇. 4.6DNA分子量标准：DL2000. 4.7AMV反转录酶及反应缓冲液. 4.8 dNTPs Mixture. 4.9RNA酶抑制剂(40U/μL). 4.10 rTag mix. 4.11反转录及PCR扩增引物：见附录B. ...
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