ICS67.100.01 X16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3050-2016 羊奶真实性鉴定技术规程 Code of practice for adulteration in goat milk product 2016-12-23发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T3050-2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业部畜牧业司提出. 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口. 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室 (北京)、青岛农业大学、安徽农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所. 本标准主要起草人：郑楠、屈雪寅、杨晋辉、杨永新、胡菡、周雪巍、李松励、叶巧燕、于建国、文芳、许 晓敏、韩荣伟、张养东、程建波、王加启. I NY/T3050-2016 羊奶真实性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了聚合酶链式反应(PCR)方法、二维凝胶电泳(2-DE)法及酶联免疫吸附(ELISA)法， 对生羊奶、超高温灭菌(UHT)液态羊奶和羊奶粉中掺入牛源性奶成分的定性检测方法. 本标准第一法和第二法适用于生羊奶、UHT灭菌液态羊奶及羊奶粉；第三法适用于生羊奶. 本标准第一法的检出限为：生羊奶中掺假2.0%生牛奶，生羊奶掺假0.2%牛奶粉，UHT液态羊奶 掺假5.0%UHT液态牛奶，羊奶粉掺假2.0%牛奶粉；第二法的检出限为生羊奶掺假5.0%生牛奶，生 羊奶掺假1.0%牛奶粉，UHT液态羊奶掺假5.0%UHT液态牛奶，羊奶粉掺假2.0%牛奶粉；第三法 的检出限为生羊奶掺假0.1%生牛奶. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 第一法聚合酶链式反应(PCR)法 3原理 提取奶及奶制品中体细胞DNA 利用牛特异性的引物通过PCR扩增牛特定的DNA序列，电泳分 离PCR产物，以牛源性成分PCR产物作对照，初步判断是否含有牛源性奶成分.通过对PCR扩增的 特定DNA片段进行测序，与标准序列进行比较，确认检测结果. 4试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水应符合GB/T6682一级水的要求. 4.1无水乙醇. 4.275%乙醇. 4.3三羟甲基氨基甲烷(Tris). 4.4琼脂糖：电泳级. 4.5蛋白酶K:20g/L. 4.6核酸荧光染料. 4.7DNA分子量标记(Marker):50bp~500bp 4.8牛源性成分检测用引物（对）序列： 正向：5'-GCCATATACTCTCCTTGGTGACA-3'; 反向：5'-GTAGGCTTGGGAATAGTACGA-3'. 4.9磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)：分别称取磷酸二氢钾0.27g、磷酸氢二钠1.42g、氯化钠8.0g、氯化 钾0.2g 于800mL水中充分溶解，用浓盐酸调节溶液pH至7.4，加水定容至1L 分装后高压灭菌. 4.10氯化钠溶液(0.9g/L):称取0.90g氯化钠，于800mL水中充分溶解后，加水定容至1L. 4.11乳化缓冲液：取430mL浓度为0.9g/L的氯化钠溶液(4.10)，加入10mL聚乙二醇对异辛基苯 1 ...
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