ICS65.020.30 B41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7227-2017 传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等 温扩增(RT-LAMP)检测方法 Detection method of reverse transcriptation loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP)for infectious haematopoietic necrosis virus 2017-12-22发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 SC/T7227-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本标准由农业部渔业渔政管理局提出. 本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口. 本标准起草单位：全国水产技术推广总站、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检 疫科学研究院. 本标准主要起草人：贾鹏、郑晓聪、余卫忠、王津津、李清、刘莹、温智清、何俊强、于力、兰文升、史秀 杰、刘荭、秦智锋. SC/T7227-2017 传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等 温扩增(RT-LAMP)检测方法 1范围 本标准规定了传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的试剂和材料、器材和设 备、操作步骤、结果判定和防污染措施 本标准适用于传染性造血器官坏死病毒的初检 2规范性引用文件 、PUBLIS 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注目期的引作，便 仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件具最新版本（包括的修改单适用于 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T15805.2传染连造血器官坏死病诊断规程 GB19489 实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 OIE《水生动物疾病诊断手册》(2016版) 3缩略语 RESEARCH 下列缩略语适用手本文件 AMV逆转录酶禽类成髓细胞瘤病毒逆转录(avian myelobastosis virus se transcriptase) Bst酶：Bs DNA聚合酶（大片段）Bst DNA polymerase(large Iragment) DEPC:焦碳酸二酯(diethy pyrecarbonate) dNTPs:脱氧核侍三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate) EDTA:乙二胺四乙酸(ethlenediamine tetraacetic acid) IHNV:传染性造血器官坏死病毒infectious haematopoietic necrosis &N3 PBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphate bulfer salige) RT-LAMP:逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplifica- tion) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) 4概述 在IHNV基因组5401bp~5701bp区域设计6条特异引物（参见附录A) 在Bst酶的作用下， 65℃恒温扩增30min~60min 即可实现IHNV核酸扩增.反应结束后，加入荧光显色液即可通过颜色 变化判定结果. 5试剂和材料 5.1水：符合GB/T6682中一级水的规格. 5.2IHNV参考株：...
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