BJS 201915 含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定.pdf

附件4 含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定 BJS201915 1范围 本方法规定了含乳饮料及其原料中酪蛋白四种亚型S1-酪蛋白、as2-酪蛋白、B-酪蛋白、K- 酪蛋白含量测定的方法. 本标准适用于含乳饮料及其原料中酪蛋白总含量的测定，不适用于发酵法、酶解法、水解法等工 艺对蛋白质改性的样品. 2原理 试样溶液中的酪蛋白采用等电点沉淀后复溶，用胰蛋白酶进行酶解，同时加入同位素内标， C18水相柱分离，采用液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量. 3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1浓盐酸(HC1). 3.1.2甲酸(CH2O2):质谱级. 1 3.1.3醋酸(CH3COOH):色谱级. 3.1.4氯化钠(NaCl). 3.1.5乙腈(CHCN):质谱级. 3.1.6三羟甲基氨基甲烷(Tris C4H1iNO3). 3.1.7聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100 C34H62O11). 3.1.8 胰蛋白酶(Trypsin C6H1sO1P3):质谱级，猪源、牛源、基因工程来源均可；建议采用基因工 程级的胰蛋白酶以降低杂酶的影响. 3.2试剂配制 3.2.1盐酸溶液(6mol/L):吸取25mL浓盐酸，用水稀释并定容至50mL. 3.2.2甲酸溶液(10%V/V):吸取1mL甲酸，用水稀释并定容至10mL. 3.2.3醋酸溶液(0.3%V/V):吸取0.3mL醋酸，用水稀释并定容至100mL. 3.2.4氯化钠溶液(0.5mol/L 含0.2%Triton-X100):称取14.625g 加200mL水溶解后，加入1 mL Triton X-100(3.1.7) 混匀溶解后，用水定容至500mL. 3.2.5 Tris-HCl溶液(50mmol/L):称取6.057 g Tris 加900mL水溶解，用6 mol/L盐酸溶液(3.2.1)调pH至8.5后，用水定容至1000mL 经0.45um微孔滤膜过滤，备用. 3.2.6 胰蛋白酶液：用醋酸溶液(3.2.3)将胰蛋白酶粉末溶解至1 mg/mL后，按照单次使用量进行稀释分装，如每瓶50L或100L的0.2 mg/mL胰蛋白酶，- 2 80℃冷冻保存，避免反复冻融. 3.2.7蛋白质浓度测定试剂盒（基于考马斯亮蓝-Bradford测定法或BCA蛋白质测定法均可）. 3.2.8甲酸水溶液(0.1%V/V):吸取0.5mL甲酸，用水稀释并定容至500mL. 3.3标准品 3.3.1aS1-酪蛋白特征肽标准品：YLGYLEQLLR 纯度须准确标定，或经国家认证的标准物质. 3.3.2aS2-酪蛋白特征肽标准品：FALPQYLK 纯度须准确标定，或经国家认证的标准物质. 3.3.3B-酪蛋白特征肽标准品：VLPVPQK 纯度须准确标定，或经国家认证的标准物质. 3.3.4K-酪蛋白特征肽标准品：YIPIQYVLSR 纯度须准确标定，或经国家认证的标准物质. 3.3.5 aS1-酪蛋白特征肽内标标准品：PSERYLGYL*(13C6 15N)EQLLRLKKY HPLC级纯度≥ 98%. 3.3.6 aS2-酪蛋白特征肽内标标准品：RYQKFALPQYL(13C6 15N)KTVYQ HPLC级纯度≥ 98%. 3.3.7B-酪蛋白特征肽内标标准品：SQSKVL*(13C6 15N)PVPQKAVPY HPLC级纯度≥98%. 3.3.8 K-酪蛋白特征肽内标标准品：KIAKYIPIQYVL*(13C6 1N)SRYPSY ...