附件2 小麦粉及其面粉处理剂中苯甲羟肟酸的测定 BJS202002 1范围 本方法规定了小麦粉及其面粉处理剂中苯甲羟肟酸的高效液相色谱测定方法. 本方法适用于小麦粉及其面粉处理剂中苯甲羟肟酸的测定. 2原理 试样中的苯甲羟肟酸用甲醇提取，采用高效液相色谱测定，外标法定量.试样中检出苯甲羟 肟酸后采用液相色谱-质谱/质谱法进行确证. 3试剂和材料 除非另有说明，本方法试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1甲醇(CH3OH):色谱纯. 3.1.2磷酸(H3PO4). 3.1.3甲酸铵(HCOONH4):色谱纯. 3.2试液配制 3.2.1 磷酸溶液(0.01%)：准确量取1000 mL水，加入100 uL磷酸(3.1.2)得到pH在2.90.1之间的磷酸溶液. 3.2.2 甲酸铵溶液(5 mmol/L):称取甲酸铵0.26 g(3.1.3)(精确至0.001 g) 加水溶解并定容至1000mL. 3.3标准品 3.3.1 苯甲羟肟酸：纯度不低于98%的标准品或经国家认证并发布的有证标准物质.其中文名称、英文名 称、CAS号、分子式、相对分子质量、结构式见附录A. 3.4标准溶液配制 3.4.1 标准储备液：准确称取苯甲羟肟酸标准品10mg(精确至0.01mg) 置于50 mL容量瓶中，加甲醇-水溶液(50/50，v/v)溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为200 4g/mL的标准储备液，4℃避光保存，有效期90天. 3.4.2标准中间液(20.0ug/mL):吸取标准储备液(3.4.1)5mL于50mL容量瓶中，用甲醇- 水溶液(50/50，v/V)稀释至刻度，摇匀，得到标准中间液，4℃避光保存，有效期60天. 3.4.3 标准系列工作液：吸取标准中间液(3.4.2)0.25mL、0.50mL、1.25mL、2.5mL、5.0 mL和12.5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇- 水溶液(50/50，v/V)稀释至刻度，混匀，得到标准系列工作液.浓度分别为0.10 ug/mL、0.20 ug/mL、0.50g/mL、1.0g/mL、2.0pg/mL和5.0g/mL 4℃避光保存，有效期30天. 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器. 4.2电子天平：感量分别为1mg和0.01mg. 4.3pH计：精确至0.01. 4.4涡旋振菏器. 4.5超声波发生器. 4.6高速离心机：转速不低于8000r/min. 4.7滤膜：有机相，孔径0.22um. 1 5分析步骤 5.1试样制备 称取具代表性小麦粉或面粉处理剂样品约200 g 混合均匀，贮存于洁净广口容器中，干燥避光保存备用. 5.2试样处理 准确称取试样2 g(精确至0.001 g) 置于50 mL具塞离心管中，准确加入10 mL甲醇(3.1.1)，手动振荡20次，涡旋1min 超声提取10min 在4℃下8000r/min离心5 min 取离心后上清液5 mL 于45 ℃氮气吹至近干，甲醇-水溶液(50/50，v/V)定容至1 mL 涡旋混匀后过0.22 m有机相微孔滤膜(4.7)，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测试样液. 5.3液相色谱参考条件 a)色谱柱：C18色谱柱(4.6mmx150mm 5um)或性能相当者. b)流动相：A为0.01%的磷酸溶液(3.2.1)，B为甲醇(3.1.1)，梯度洗脱程序见表1. c)流速：1.0mL/mino d)检测波长：228nm. e)柱温：35℃. f)进样量：20uL. 苯甲羟肟酸标准溶液的液相...
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