BJS 食品补充检验方法 BJS202009 小麦粉中间苯二酚的测定 高效液相色谱法 2020-11-19发布 国家市场监督管理总局发布 BJS202009 小麦粉中间苯二酚的测定 高效液相色谱法 1范围 本方法规定了小麦粉中间苯二酚含量的液相色谱测定方法. 本方法适用于小麦粉中间苯二酚的测定. 2原理 试样中的间苯二酚经甲醇提取，蛋白沉淀剂沉淀，采用液相色谱C8-Amide柱分离，荧光检测器检 测，外标法定量. 3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1甲醇(CHOH):色谱纯. 3.1.2亚铁氰化钾[KFe(CN)3H2O]. 3.1.3乙酸锌[Zn(CH COO)22HO]. 3.1.4冰醋酸(CH COOH). 3.2试剂配制 3.2.1亚铁氰化钾溶液(92g/L):称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000L 3.2.2乙酸锌溶液(183g/L):称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰醋酸，用水定容至 1000mL. 3.3标准品 3.3.1间苯二酚标准品(C;HO2 CAS号：108-46-3，相对分子质量110.00)或经认证并授予标准物质 证书的标准物质. 3.4标准溶液的配制 3.4.1间苯二酚标准储备液(1.00mg/mL):准确称取间苯二酚标准品(3.3.1)10mg(精确至0.1mg) 用甲醇(3.1.1)溶解，配制成质量浓度为1.00mg/mL标准储备液，一18℃避光保存，不超过2周. 3.4.2标准中间液：准确移取1.00mL间苯二酚标准储备液(3.4.1)于10mL和100mL容量瓶中，用 甲醇(3.1.1)稀释至刻度，摇匀，制备质量浓度为100μg/mL和10.0g/mL的标准中间液.临用现配. 3.4.3标准工作溶液：吸取间苯二酚标准中间液(3.4.2)，用甲醇(3.1.1)稀释成质量浓度分别为 0.0100g/mL、0.0200g/mL、0.100g/mL、0.500pg/mL、1.00pg/mL、5.00pg/mL、10.0g/mL 标准工作溶液.临用现配. 1 BJS202009 3.5材料 3.5.1微孔滤膜：有机相，孔径0.22μm. 3.5.2比色管：25mL 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪，配荧光检测器. 4.2电子天平：感量分别为0.1mg和0.001g. 4.3涡漩振荡器. 4.4超声波清洗器. 4.5高速离心机. 4.6样品粉碎机. 5试样制备与保存 取代表性的试样不少于200g 装入洁净容器内密封并做好标识，置于阴凉干燥处保存. 6测定步骤 6.1试样处理 称取5g试样（精确至0.001g)于25mL比色管中，加入15mL甲醇(3.1.1）涡漩混匀，超声 15min 放置至室温后加入1mL亚铁氰化钾溶液(3.2.1)和1mL乙酸锌溶液(3.2.2)，用甲醇定容至刻 度，混匀1min.于7000r/min离心3min 取适量上清液过0.22m有机相滤膜，待液相色谱测定. 6.2仪器参考条件 仪器参考条件如下： a)色谱柱：C18-Amide(150mmX4.6mm 3m)或性能相当者； b)流动相：A为水，B为甲醇，梯度洗脱条件见表1； c)柱温：40℃； d)进样体积：10L; e)荧光检测器，激发波长273nm 发射波长304nm;增益值：无增益. 表1梯度洗脱程序 时间/min 流速/(mL/min) A/% B/% 0.01 0.70 98.0 2.0 10.00 0.70 60...
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