BJS 食品补充检验方法 BJS202108 蜂蜜中雷公藤甲素的测定 2021-07-28发布 国家市场监督管理总局发布 BJS202108 蜂蜜中雷公藤甲素的测定 1范围 本方法规定了蜂蜜中雷公藤甲素的液相色谱串联质谱测定方法. 本方法适用于蜂蜜中雷公藤甲素的定性和定量测定. 2原理 试样中雷公藤甲素（雷公藤内酯醇）经乙酸乙酯提取，-丙基乙二胺固相萃取柱净化，用液相色谱- 串联质谱测定，外标法定量. 3试剂与材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1甲醇(CHOH):色谱纯. 3.1.2乙酸乙酯(C4HO2). 3.1.3甲酸(HCOOH):色谱纯. 3.2溶液配制 3.2.1甲醇溶液：甲醇：水(11，体积比). 3.2.20.1%甲酸溶液：1mL甲酸溶解于水中，并定容至1L. 3.3标准品 雷公藤甲素(Triptolide CnHz4O CAS号：38748-32-2)标准品：纯度≥98%. 3.4标准溶液制备 3.4.1雷公藤甲素标准储备液(1mg/mL):准确称取雷公藤甲素标准品20.0mg于10mL烧杯中，用 甲醇溶解后转移到20L容量瓶中，并用甲醇定容.4℃避光保存，有效期1个月. 3.4.2雷公藤甲素标准中间液(1g/mL):准确量取雷公藤甲素标准储备液(1mg/mL)(3.4.1)100L 置 于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1g/mL的雷公藤甲素标准中间液. 4℃避光保存，有效期1个月. 3.5材料 3.5.1离心管：50mL 3.5.2N-丙基乙二胺固相萃取柱(500mg/6mL)或其他等效柱. 3.5.3微孔滤膜：0.22μm 有机系. 1 BJS202108 4仪器和设备 4.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾(ESI)离子源. 4.2分析天平：感量0.0001g和0.001g. 4.3氮吹仪. 4.4涡漩混合器. 4.5固相萃取装置. 4.6超声波清洗器. 4.7离心机：转速≥10000r/min. 4.8旋转蒸发器. 4.9移液器：100L 1mL 5mL 5分析步骤 5.1试样的制备与保存 对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀.对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于低于 60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时应注意防止水分挥发. 装入洁净容器，密封，标明标记. 5.2试样的处理 5.2.1提取 称取试样2g(精确至0.001g)置于50mL离心管中，加入4mL水与蜂蜜充分混匀，加人乙酸乙酯 15mL 涡漩振荡5min 超声10min 以10000r/min离心5min 取上清液，沉淀再加入乙酸乙酯 15mL 重复提取1次，合并上清液，旋转蒸发至干. 5.2.2净化 残渣用2mL乙酸乙酯溶解，过N-丙基乙二胺固相萃取柱，用乙酸乙酯5mL洗脱，收集洗脱液，氮 气吹干.准确量取甲醇溶液1mL溶解残余物，经0.22μm微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定. 5.3基质标准工作曲线的制备 准确量取雷公藤甲素标准中间液(1g/L)适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成雷公藤甲素 质量浓度为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的系列基质标准工作溶 液，或根据需要配制适当浓度的基质标准工作溶液；现配现用.以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以 峰面积为纵坐标，绘制基质标准工作曲线. 5.4液相色谱-串联质谱测定 5.4.1液相色谱参考条件如下： a)色谱...
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