BJS 食品补充检验方法 B.JS202301 动物源性食品中瓜尔胶的测定 2023-06-13发布 国家市场监督管理总局发布 BJS202301 动物源性食品中瓜尔胶的测定 1范围 本方法规定了猪肉、牛肉、羊肉中瓜尔胶的液相色谱串联质谱测定方法. 本方法适用于猪肉、牛肉、羊肉中瓜尔胶的测定. 2原理 样品及标准品经甘露聚糖酶酶解，加入乙腈沉淀蛋白后离心，上清液经过中性氧化铝柱净化，用 液相色谱-串联质谱仪检测酶解产物特征寡糖，外标法测定瓜尔胶含量. 3试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1乙腈(CHCN):色谱纯. 3.1.2磷酸氢二钠(Na2HPO4). 3.1.3一水合柠檬酸(C%HO H2O). 3.1.43-甘露聚糖酶(CAS:37288-54-3):≥98%，酶活力10000U/g. 3.2试剂配制 3.2.1磷酸氢二钠溶液(0.2mol/L):称取14.2g磷酸氢二钠(3.1.2)，用水溶解并稀释至500mL. 3.2.2柠檬酸溶液(0.1mol/L):称取21.0g一水合柠檬酸(3.1.3)，用水溶解并稀释至1000mL. 3.2.3 Mcllvaine缓冲溶液：量取678mL柠檬酸溶液(3.2.2)于1000mL烧杯中，加入322mL磷酸氢 二钠溶液(3.2.1)，混匀. 3.2.43-甘露聚糖酶溶液(0.2mg/mL):称取0.01g8-甘露聚糖酶(3.1.4)于具塞试管中，加入50mL Mcllvaine缓冲溶液(3.2.3)，混匀.临用现配. 3.3标准品 瓜尔胶：纯度≥98.5%.瓜尔胶的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和结构式见附录A. 3.4标准溶液配制 标准溶液(1.0mg/mL):准确称取瓜尔胶标准品(3.3)0.1g(精确至0.0001g) 用水溶解并定容至 100mL 混匀.临用现配，使用时再次摇匀. 3.5材料 3.5.1固相萃取柱：中性氧化铝柱，500mg/6mL 或性能相当者. 3.5.2微孔滤膜：有机滤膜，孔径0.22μm. 1 BJS202301 4仪器和设备 4.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源(ESI). 4.2多管涡旋混合仪. 4.3高速冷冻离心机：转速≥12000r/min. 4.4恒温水浴振荡器. 4.5电子天平：感量分别为0.01g和0.0001g. 4.6组织粉碎机. 4.7固相萃取装置. 5分析步骤 5.1试样的制备与保存 空白或供试样品，约200g 取瘦肉部分，用组织粉碎机(4.6)均质，得到糜状试样，一18℃及以下 保存. 取均质的供试样品，作为供试试样. 取均质的空白样品，作为空白试样. 5.2试样的处理 5.2.1酶解 称取试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，依次加入8 mL Mcllvaine缓冲溶液(3.2.3)和0.5mL 8-甘露聚糖酶溶液(3.2.4)，加盖后涡旋10min 放入55℃土5℃恒温水浴振荡器中酶解7h~16h 取 出冷却后于4℃12000r/min离心5min 将上清液转移至玻璃试管中，在沸水浴中加热10min 冷却 后转移至10mL比色管中，加水至刻度线，混匀后取1.00mL于离心管中，加入1.00mL乙腈(3.1.1)混 匀，4500r/min离心2min 取上清液待净化. 5.2.2净化 取1.00mL待净化液，通过中性氧化铝柱(3.5.1，无需活化)，用刻度管接收流出液，再用2mL水洗 脱，合并接收液.将接收液用乙(3.1.1)补足至4mL 混匀后过0.2...
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